斑点叉尾鮰鱼皮胶原蛋白理化特征及复合材料制备的研究

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本文研究了斑点叉尾鮰鱼皮酸溶性和酶溶性胶原蛋白的理化特性,并将提取得到的胶原蛋白进行加工得到胶原蛋白生物复合材料,对合成的复合材料的细胞相容性进行初步研究。主要研究结果如下:1.胶原蛋白提取和理化特性研究(1)用乙酸和乙酸-胃蛋白酶方法,分别提取鱼皮中的酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白,分别对胶原蛋白中羟脯氨酸含量进行测定,结果表明提取得到的酸溶性纯度高达93.11%,酶溶性纯度高达93.46%。使用乙酸和乙酸-胃蛋白酶提取的方法可以得到纯度较高的胶原蛋白。(2)对提取得到的胶原蛋白分别进行紫外光谱分析、傅里叶红外光谱分析和SDS-PAGE电泳测定。结果表明,酸溶性和酶溶性胶原蛋白具备Ⅰ型胶原蛋白的特征,属于Ⅰ型胶原蛋白,具有完整的三螺旋结构。(3)对胶原蛋白进行变性温度测定和氨基酸分析,结果表明斑点叉尾鮰胶原蛋白中含有大量的甘氨酸,但其变性温度和羟脯氨酸含量均低于哺乳动物胶原蛋白。同时,酸溶性胶原蛋白和酶溶性胶原蛋白的变性温度和氨基酸含量也有一定的区别。2.胶原蛋白生物复合材料制备与理化特性研究(1)采用原位合成的方法,得到胶原蛋白生物复合材料,并用0.25%戊二醛对得到的复合材料进行交联。(2)对复合材料进行XRD分析,发现用原位合成的方法得到的复合材料中的羟基磷灰石属于弱结晶,结晶度较低。低结晶度的复合材料将在一定程度上有利于其自身在生物体内的的生物降解性能,同时有利于细胞在复合材料上的粘附和增殖。(3)对复合材料进行电镜扫描、孔隙率测定,结果表明,复合材料孔隙率均在90%以上,具有多孔性且外观形状规则,孔径大小适宜,同时有足够的内部表面积供细胞贴附。当胶原蛋白和羟基磷灰石比例为50:50时,孔径一般在40-100μm,孔隙之间有较好的连通性,可以很好的排出代谢废物,且有利于营养物质的交换。当胶原蛋白和羟基磷灰石比例为30:70时,孔径一般在20μm左右,而孔壁明显变厚。3.不同配比的胶原蛋白生物复合材料细胞相容性研究(1)使用胶原蛋白复合材料的浸提液对MC3T3进行培养,发现随着培养时间的延长,各实验组的细胞逐渐出现信号转导,细胞进行大量的有丝分裂,培养到第7天,细胞增长越来越密集,呈现瓦状排列,基本融合成单层细胞。而在30:70ASC复合材料的一组中,细胞生长状态不好,表明该组复合材料具有一定的细胞毒性。(2)采用MTT法,对各组复合材料浸提液中的细胞增殖率进行测定。随着培养时间延长,各组培养细胞数量和活力均一直在增加,但不同组之间存在一定差异。50:50ASC复合材料一组中的细胞增殖率一直都是最高的。结果表明,50:50ASC组复合材料具有最好的细胞相容性。
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