【摘 要】
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目的:探讨人骨髓基质细胞在向神经细胞定向诱导后体内移植的存活及分化状况。 方法步骤: 1.采用淋巴细胞分离液按密度梯度离心法分离成人骨髓,反复贴壁法纯化扩增骨髓基质
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目的:探讨人骨髓基质细胞在向神经细胞定向诱导后体内移植的存活及分化状况。 方法步骤: 1.采用淋巴细胞分离液按密度梯度离心法分离成人骨髓,反复贴壁法纯化扩增骨髓基质细胞。 2.选用培养的第三代人骨髓基质细胞(hMSCs),在bFGF预诱导前先经荧光染料Hoechst33342标记24小时,DMEM反复漂洗5次,除去未结合的Hoechst;预诱导后用阿魏酸钠诱导24小时。诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化。观察细胞核荧光显色情况。 3.采用线栓法复制SD大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型,缺血2小时后行再灌注。 5.于再灌注24小时后将Hoechst33342标记并阿魏酸钠诱导后的hMSC经栓塞侧颈内动脉输入动物模型脑内,每只大鼠移植hMSC约5×10~6/0.8ml。 6.移植第14天,麻醉大鼠,开胸经心脏用PBS冲洗血管,用4%多聚甲醛灌注固定,取出脑组织用30%的蔗糖沉底。 7.将取出的脑组织自视交叉向后冠状切取脑组织冰冻切片,在荧光显微镜下寻找Hoechst33342标记的细胞,采用免疫组织荧光染色法(FITC标记二抗)检测人细胞核特有抗体MABl281阳性表达,并检测神经干细胞标志物nestin及神经元细胞标志物NSE表达情况。 结果:1.hMSC经阿魏酸钠诱导24小时后,镜下可见细胞形态发生明显变化,
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