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第一部分人外周血B10细胞的表型及功能鉴定目的:鉴定人外周血B10细胞的表型及功能。方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞,流式细胞术检测IL-10~+B淋巴细胞与IL-10-B淋巴细胞的表面标志,比较IL-10~+B与IL-10-B淋巴细胞表面CD分子的平均荧光强度,并比较不同B淋巴细胞亚群IL-10的分泌水平。流式细胞术分选B10细胞与CD4~+CD25-T细胞共培养,观察B10细胞对CD4~+细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17及表达Foxp3的影响。采用中和抗体阻断实验探索B10细胞作用的可能机制。结果:(1)IL-10~+B淋巴细胞较IL-10-B淋巴细胞高表达CD24及CD38,IL-10~+B淋巴细胞表面CD24和CD38的平均荧光强度明显高于IL-10-B淋巴细胞,差异有统计学意义(P<0.01),CD19~+CD24hiCD38hiB淋巴细胞高分泌IL-10;(2)健康人外周血B10细胞能明显抑制CD4~+T细胞分泌IFN-γ(P<0.01)、TNF-α(P<0.01)和 IL-17(P<0.05),促进 CD4~+T 细胞分泌 IL-4(P<0.01)及表达Foxp3(P<0.05),结果具有统计学意义;(3)在B10细胞与CD4~+T细胞共培养体系中加入IL-10/IL-10R中和抗体后CD4~+T细胞分泌IFN-γ(P<0.01)、TNF-α(P<0.001)和 IL-17(P<0.05)水平上升,分泌 IL-4(P<0.05)及表达Foxp3(P<0.05)水平下降,结果具有统计学意义。而在加入CD80和CD86中和抗体后,CD4~+T细胞分泌IFN-γ(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)水平上升,而分泌IL-17、IL-4及表达Foxp3水平未见明显改变(P>0.05)。结论:外周血B10细胞的表型为CD19~+CD24hiCD38hi;健康人外周血B10细胞具有免疫调节功能,可调节CD4~+T细胞各亚群平衡;B10细胞主要通过分泌细胞因子IL-10发挥免疫调节功能。第二部分T1D患者外周血B10细胞数量的检测与分析目的:检测和分析TID患者外周血B10细胞的数量变化。方法:本研究共入选受试者136例,其中T1D患者62例、健康对照74例。收集受试者外周血,分离单个核细胞,流式细胞术检测比较T1D患者和健康对照外周血各亚群T淋巴细胞及B10细胞的比例,分析T1D患者外周血B10细胞与T淋巴细胞亚群平衡的相关性,并分析T1D患者外周血B10细胞与初诊年龄、年龄、病程、性别及糖化血红蛋白水平的相关性。结果:(1)与健康对照相比,T1D患者外周血CD4~+T淋巴细胞比例较高,且其分泌IFN-γ、TNF-α及IL-17的比例增高,差异具有统计学意义(P<0.05),而分泌IL-4的比例减少,差异具有显著统计学意义(P<0.001);(2)与健康对照相比,T1D患者外周血B10细胞占B淋巴细胞的比例降低,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)T1D患者外周血B10细胞数量与CD4~+T细胞数量呈负相关(P<0.05),且与其分泌IFN-γ及TNF-α的水平呈负相关(P<0.05),与CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞数量呈明显正相关(P<0.01);(4)T1D患者外周血B10细胞与年龄、初诊年龄、病程及性别均未见明显相关(P>0.05),与检测时糖化血红蛋白水平呈负相关(P<0.05)。结论:T1D患者外周血存在着T淋巴细胞亚群比例的失衡:CD4~+T淋巴细胞比例的增高,且CD4~+T淋巴细胞分泌致病性细胞因子比例增高,分泌保护性细胞因子比例降低;T1D患者外周血存在着B10细胞数量的减少;T1D患者外周血B10细胞数量与分泌致病性细胞因子的CD4~+T淋巴细胞数量呈反比,与保护性Tregs数量呈正比,与HbA1c呈反比,提示B10细胞数量的变化可能参与了 T1D的发病。第三部分T1D患者外周血B10细胞功能的初探目的:观察T1D患者外周血B10细胞免疫调节功能的变化,探索B10细胞参与T1D发病的可能机制。方法:分离T1D患者外周血单个核细胞,流式细胞术反向剔除B10细胞,观察对CD4~+T细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17及表达Foxp3的影响。检测T1D患者外周血B10细胞IL-10的分泌水平。结果:(1)与健康对照组相比,T1D患者外周血单个核细胞反向剔除B10细胞后CD4~+T细胞分泌IFN-y、TNF-α、IL-17有上升趋势,表达Foxp3有下降趋势,但均未见明显统计学差异(P>0.05),但CD4~+T细胞分泌IL-4仍有下降趋势,且具有统计学意义(P<0.05);(3)与健康对照组相比,T1D患者外周血B10细胞IL-10分泌水平明显降低,差异具有显著统计学意义(P<0.001)。结论:T1D患者外周血B10细胞存在免疫调节功能缺陷,可能与分泌细胞因子IL-10显著减少有关。