目的:在原医疗机构制剂的基础上,研发一种治疗失眠症的6类中药新药。依据《药品注册管理办法》(局令第28号)和《中药、天然药物研究技术指导原则(2006年)》的有关规定,对临床上治疗失眠的清心神安方开展其制备工艺、质量标准、稳定性以及初步药效学试验等临床前药学研究,为申报一种工艺可行、质量稳定、毒副作用较小、使用携带方便、价格低廉的中药新药奠定基础。方法:制备工艺研究(1)提取物制备工艺路线的确定:以戊巴比妥钠处理小鼠的睡眠时间为评价指标,结合文献研究,比较水提工艺、水提醇沉工艺和醇提结合水提工艺的优劣,优选制备工艺路线。(2)提取工艺研究:在上述制备工艺路线的基础上,采用单因素比较结合正交试验法,以斯皮诺素、栀子苷含量及固形物得率为考察指标,对影响提取效果的浸泡时间、提取次数、溶媒用量及提取时间进行优选,并进行3批验证。(3)纯化工艺研究:采用正交试验法,以斯皮诺素、栀子苷的保留率和固形物得率为指标,对影响纯化的浓缩液相对密度、药液含醇量和醇沉时间进行优选。(4)浓缩与干燥工艺研究:以斯皮诺素、栀子苷的保留率为考察指标,比较常压、减压两种不同的浓缩方法、不同铺盘厚度的浓缩液真空干燥方法,确定最佳浓缩、干燥工艺条件。(5)量效关系考察:以戊巴比妥钠处理小鼠的睡眠时间为评价指标,考察提取物的日服起效剂量。(6)成型工艺研究:考察所得浸膏粉吸湿速率、临界相对湿度确定物料吸湿性与实验环境的相对湿度控制范围;以颗粒成型性、吸湿性、溶化率为指标,筛选辅料种类及用量。考察干法制粒工艺条件和制剂防潮条件,并进行三批中试验证试验。质量标准研究参照《中国药典》2015年版及相关文献资料开展制剂的质量标准研究,采用薄层色谱法,建立制剂所涉及药材的薄层色谱鉴别方法;采用高效液相色谱法,建立君药酸枣仁中斯皮诺素和臣药梔子中栀子苷的含量测定方法;依据制剂通则要求,建立制剂的相关定性定量检查(如颗粒的粒度、水分、溶化性、装量差异等)方法;依据建立的制剂质量标准,考察制剂在市售包装条件下的加速稳定性和常温稳定性。药效学研究以戊巴比妥钠阈下剂量处理小鼠的翻正次数为观察指标,考察不同剂量的清心神安颗粒对戊巴比妥纳阈下剂量处理小鼠睡眠的作用效果。结果:(1)制备工艺研究确定提取物的制备工艺路线为:全方水提醇沉,经浓缩(回收乙醇)、干燥制成提取物;优化的水提取工艺条件确定为:水提三次,每次加10倍量水,提取2 h,验证试验结果表明,该工艺稳定可行,斯皮诺素和梔子苷的平均含量分别为0.2208 mg/mL和1.39 mg/mL;优化的浓缩方式为减压浓缩,斯皮诺素和栀子苷的平均保留率分别为82.88%和86.98%;优化的纯化工艺为:药液相对密度为1.05(60℃),醇沉浓度60%,醇沉时间为36 h,该条件下斯皮诺素和栀子苷的平均保留率为88.04%和69.95%;优化的干燥方式为真空干燥,浓缩液浓缩至无醇味,铺盘厚度约0.8 cm所得干燥物中指标成分的含量较高;量效考察结果为本品提取日服生药为90 g,成型工艺优选的填充剂为麦芽糊精,浸膏粉与辅料比约为9:1时1 min内溶解,吸湿性为9.78%、溶化性为95.24%,综合评分值为97.57%;采用干式制粒法,控制药粉含水量在3%-5%;包装材料选择纯铝复合膜。三批中试样品经相关检查质量均符合要求,斯皮诺素和梔子苷的转移率分别为59.09%和45.95%。(2)质量标准及稳定性研究建立制剂中酸枣仁、生地黄、栀子、合欢花四味药的薄层色谱鉴别方法,建立了制剂中斯皮诺素和栀子苷的检测方法及含量限度;建立了成品的性状、粒度、7水分、溶化性、装量差异检查方法;初步加速稳定性考察表明所研究的制剂在上市包装条件下稳定,暂定制剂的有效期为2年。(3)药效学研究所制成的制剂对腹腔注射阈下剂量戊巴比妥钠小鼠的翻正反射消失百分率明显增加。清心神安颗粒有明显协同戊巴比妥钠促进小鼠睡眠的作用。结论:清心神安颗粒制备工艺合理、质量可控,且稳定,达到预期的研究目的,为下一步开展临床研究和工业生产提供了可靠的实验依据。