香蕉穿孔线虫[Radopholus similis(Cobb,1893)Thorne,1949]是一种内寄生植物病原线虫,严重危害多种经济作物以及观赏植物。化学防治是如今对香蕉穿孔线虫最常用的防治方法,但是化学杀线剂的过量使用严重污染环境和危害人类健康,因此以生物技术为策略、以线虫寄生致病基因为靶标的可持续防治该线虫的新方法已成为关注的热点。在靶标基因功能分析研究中,需要根据试验因素选择理想的内参基因进行校正和标准化,保证定量分析的准确性。但是迄今尚未有香蕉穿孔线虫内参基因的研究报道。乙酰辅酶A转运蛋白(Acetyl-coenzyme A transporter,ACATN)是内质网中的多重跨膜蛋白,参与神经节苷脂中唾液酸的O-乙酰化过程。研究香蕉穿孔线虫ACATN有助于获得更多潜在的靶标基因。但是目前尚未有植物寄生线虫ACATN基因(acatn)的报道。本研究利用香蕉穿孔线虫转录组数据库和qPCR技术筛选香蕉穿孔线虫的理想内参基因,并从该数据库中筛选克隆了香蕉穿孔线虫acatn,利用筛选出的内参基因对该acatn进行定量分析,获得的主要研究结果如下:1、利用生物信息学的方法在香蕉穿孔线虫转录组数据库中挖掘6个候选内参基因,包括4个传统的内参基因(Act1、eIF5A2、TUB、UBC)和2个新的候选内参基因(CBR、β-PP1),并在NCBI上选择了1个传统的内参基因18S rRNA。利用实时荧光定量PCR技术对这7个候选内参基因在香蕉穿孔线虫6个种群和其中的GJ种群不同虫态(雌虫、雄虫、幼虫、卵)的表达进行检测,通过BestKeeper、ge Norm、Norm Finder三种方法评估候选内参基因的表达稳定性,确定eIF5A2是香蕉穿孔线虫不同种群基因功能研究中的最适合的内参基因,CBR和eIF5A2是香蕉穿孔线虫某一种群不同虫态基因功能研究中的最适合内参基因,而eIF5A2是研究香蕉穿孔线虫实验中最理想的内参基因。2、本研究从香蕉穿孔线虫转录组数据库选择一条与大豆胞囊线虫(Heterodera glycines)的假定食道腺蛋白相似的转录本CL1740.Contig4,根据此转录本,使用RACE技术克隆并测序得到了香蕉穿孔线虫乙酰辅酶A转运蛋白基因(Rs-acatn-1)的c DNA全长,该序列共1071 bp,开放阅读框长738 bp,编码蛋白含245个氨基酸,DNA编码区序列为1063 bp,包括5个外显子和4个内含子,预测蛋白分子量约为27806.83,该蛋白还具有信号肽、跨膜区等结构。3、通过qPCR明确了Rs-acatn-1基因在香蕉穿孔线虫不同虫态中均能表达,雄虫和卵的表达量较高,雌虫和幼虫次之,但它们之间差异不显著。本研究筛选出了香蕉穿孔线虫的理想内参基因eIF5A2,为香蕉穿孔线虫相关基因表达定量分析的准确性提供了保证;本研究获得的香蕉穿孔线虫乙酰辅酶A转运蛋白基因是首个植物寄生线虫的乙酰辅酶A转运蛋白基因,为进一步研究植物寄生线虫乙酰辅酶A转运蛋白基因的功能奠定了基础,对探索该基因在植物寄生线虫防治中的价值具有重要的意义。