论文部分内容阅读
目的:1.通过检测子宫内膜异位症病灶组织与正常内膜组织中CD146、miR-329、MMP-9及VEGF的表达,分析CD146、miR-329、MMP-9及VEGF与子宫内膜异位症发生发展之间的关系。2.通过在正常子宫内膜间质细胞及异位子宫间质内膜细胞中干扰CD146、miR-329的表达,研究CD146、miR-329与子宫内膜异位症发生的潜在的分子机制。方法:1.取人正常子宫内膜组织和子宫内膜异位症患者异位内膜组织,qRT-PCR测定CD146、miR-329、MMP-9的表达水平,Western blotting法测定MMP-9和VEGF蛋白表达水平。2.提取并分离、纯化正常子宫内膜组织间质细胞和异位内膜间质细胞,细胞形态学及免疫组化鉴定子宫内膜间质细胞,流式细胞仪检测正常子宫内膜细胞及异位子宫内膜细胞CD146表达情况。3.将CD146siRNA分别转染子宫内膜间质细胞与异位子宫内膜间质细胞中,qRT-PCR测定转染后CD146、MMP-9的表达情况,Western blotting检测MMP-9及VEGF的表达量,了解CD146对于子宫内膜异位症发生的影响。4.用ribo FECT?CP转染试剂在异位子宫内膜间质细胞及正常子宫内膜间质细胞中分别转染miR-329mimic及miR-329 inhibitor。qRT-PCR测定转染后CD146的表达情况。结果:1.qRT-PCR检测发现CD146及MMP-9在异位病灶组织中的表达量明显高于正常子宫内膜组织,异位病灶组织中miR-329的表达量显著低于正常子宫内膜组织。Western blotting检测异位病灶组织中的MMP-9和VEGF表达明显高于正常内膜组织,差异有统计学意义。2.成功提取正常子宫内膜及异位子宫内膜间质细胞,经纯化、形态学及免疫组化鉴定为子宫内膜间质细胞并可传代,流式细胞分析结果显示异位内膜间质细胞中CD146表达比例较正常子宫内膜间质细胞比例高。3.CD146siRNA转染正常子宫内膜间质细胞和异位子宫内膜间质细胞,qRT-PCR检测CD146及MMP-9表达明显下调,差异具有统计学意义,Western blotting检测MMP-9与VEGF较未转染前下调,差异具有统计学意义。4.miR-329 inhibitor转染正常子宫内膜间质细胞,qRT-PCR检测转染组的CD146表达量较未转染组明显增加。miR-329mimic转染异位子宫内膜间质细胞,qRT-PCR检测转染组的CD146表达量较未转染组明显下降,差异有统计学意义。结论:1.在子宫内膜异位症中,异位内膜CD146表达增加、miR-329表达降低,miR-329抑制CD146的表达,敲低CD146的表达抑制MMP-9及VEGF的表达,然而MMP-9及VEGF作为炎症、侵袭及新生血管形成的典型代表,得出miR-329调控CD146表达参与子宫内膜异位症中的发生发展。2.通过对CD146或miR-329或miR-329调控CD146的具体作用机制进行进一步研究,可能对子宫内膜异位症的理解更进一步,亦或将其作为药物治疗靶点,对子宫内膜异位症的治疗提供新视野。