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目的：获得高纯度人血浆β2糖蛋白Ⅰ(β2GPI)，制备兔抗人β2GPI多克隆抗体，为进一步研究β2GPI及其抗体在抗磷脂综合征(APS)病理机制中的作用奠定基础。
方法：1．采用HClO4沉淀、HeparinSepharoseCL-6B亲和层析等方法纯化人血浆β2GPI；利用SDS—PAGE电泳、免疫印迹分析提纯蛋白的纯度；观察不同温度、NaCl浓度及防腐剂等条件下的β2GPI稳定性。2．以纯化的β2GPI作为抗原免疫新西兰大白兔，获得抗血清；进而利用ProteinA及β2GPI亲和层析柱纯化抗血清中的总IgG及抗β2GPI抗体；采用免疫双向扩散试验(IDD)、ELISA和免疫印迹等方法进行抗体验证。3．应用人β2GPI及其多克隆抗体共同刺激单核细胞株THP-1，检测其组织因子(TF)活性表达情况；利用β2GPI亲和层析柱，初步分析β2GPI与单核细胞株THP-1表面膜联蛋白A2(AnnexinA2)的结合情况。
结果：1．本法获得了高纯度目的蛋白β2GPI(＞95％)。β2GPI在低于0.8mol/LNaCl溶液中室温及4℃保存易降解变性，但在1.6mol/LNaCl溶液中室温及4℃保存60天均未见蛋白明显降解。2．IDD及ELISA鉴定抗血清及总IgG效价分别达到1：16和1：100000；免疫印迹显示纯化的总IgG和抗β2GPI抗体与β2GPI蛋白均有特异反应条带；3．β2GPI及其多克隆抗体形成的复合物能够刺激单核细胞株THP-1表达TF活性；免疫印迹实验表明，来自THP-1细胞的AnnexinA2能够与β2GPI亲和柱结合。
结论：1．通过本研究，简单方便地获得了高纯度人血浆β2GPI；在使用和保存β2GPI时要考虑到其降解的可能性，注意保存条件，必要时冻干保存。2．通过免疫动物及亲和层析方法，成功获得了兔抗人β2GPI多克隆抗体。3．应用制备的β2GPI亲和层析柱，证明了β2GPI可以结合单核细胞株THP-1表面的AnnexinA2；β2GPI与其抗体复合物能够刺激THP-1细胞表达TF活性，是导致APS高凝状态的重要机理之一。