多发性硬化（multiple sclerosis,MS）是一种常见的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。临床特点为病灶多发、复发缓解、阶梯样加重。以往关于该病的研究,多集中于该病髓鞘脱失的特点和机制等方面;该病轴索损伤的意义及机制没有被足够重视;至今,有关轴索损伤的时机、机理、临床意义及相应的治疗和康复方面研究文献仍非常缺乏。本研究选用具有MS病理和临床特征的实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠模型和神经元原代培奍技术,从体内、体外两方面对EAE轴索损伤的可能机制进行探讨,并且研究中药提取物F₀₅对EAE轴索损伤的治疗作用和机理,试图为MS/EAE轴索损伤的治疗探索一条新途径。 研究目的: 1.（1） 选用髓鞘蛋白脂质蛋白多肽（PLP）作为抗原来诱发具有缓解复发性特点的EAE小鼠模型,进而建立一个研究EAE轴索损伤和治疗的可靠模型。（2） 探讨磷酸化p38 MAPK的活化与轴索损伤的关系;（3） 探讨F₀₅通过调节EAE小鼠中枢神经系统（CNS）中p38 MAPK的活化进而对轴索损伤治疗的可能性。 2.（1） 建立体外EAE神经元、轴索损伤模型;（2） 探讨γδT细胞在EAE神经元、轴索损伤中的作用;（3） 探讨γδT细胞对EAE中细胞因子变化的调节作用以及F₀₅的治疗作用;（4） 研究F₀₅对γδT细胞导致神经元损伤的治疗可能性、有效性及其作用机理。 材料与方法: 1.应用PLP_139-151和PLP_178-191抗原、福氏佐剂和结核杆菌免疫雌性SJL小鼠,尾静脉注射百日咳杆菌,诱发EAE小鼠轴索损伤动物模型。 2.应用HE,LFB（Luxol fast blue）髓鞘染色等方法观察模型的脱髓鞘情况。使用荧光免疫组织化学和图像分析方法,研究神经丝蛋白（NF）在小鼠CNS内的表达和轴索减少情况,观察EAE小鼠轴索损伤情况。 3.使用免疫组织化学方法,研究p38 MAPK在EAE中的活化、轴索损伤时淀粉样前体蛋白（APP）的表达,探讨p38 MAPK在EAE轴索损伤中的意义;研究F₀₅对EAE小鼠CNS中p38 MAPK活化的调节作用,对轴索损