论文部分内容阅读
目的：探讨胞质M-CSF诱导人乳腺癌MCF-7细胞对5-FU和ADR耐药的分子机制。方法：荧光定量PCR检测DNA甲基转移酶DNMT3b mRNA,MDR-1mRNA的表达；epiquik DNA methyltransferase3B Activity/Inhibitor Screening Assay CoreKit试剂盒分析DNMT3b活性的变化；MSP实验分析MDR-1基因启动子甲基化水平的改变；Western Blotting检测DNMT3b以及P-gp的表达；MTT分析MCF-7细胞增殖活性。结果：荧光定量PCR实验结果显示：MCF-7-M细胞DNMT3b mRNA的表达水平显著低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)，MCF-7-M细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显高于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)，MCF-7细胞和MCF-7-C细胞中DNMT3b mRNA和MDR-1mRNA的表达水平则无明显差异(p>0.05)。活性分析实验结果显示：MCF-7-M细胞中DNMT3b的活性显著低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)。MSP实验结果显示：MCF-7-M细胞MDR-1基因启动子甲基化水平低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)。Western Blotting实验结果显示： MCF-7-M细胞中DNMT3b蛋白的表达低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)，MCF-7-M细胞P-gp的表达则显著高于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05)。 MTT实验结果显示：在不同药物不同浓度的抗肿瘤药物作用下，MCF-7-M存活率均明显高于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.05),MCF-7-C细胞的存活率相对MCF-7细胞则无明显差异(p>0.05)，MCF-7细胞、 MCF-7-C细胞MCF-7-M细胞对5-FU的IC50值分别为641.741±119.337、668.295±78.188和3359.326±343.345μmol/L；对ADR的IC50值分别为3.073±0.059、2.853±0.086和7.234±0.047μmol/L (p<0.05)。结论：胞质M-CSF可下调MCF-7细胞DNA甲基转移酶DNMT3b表达和降低其活性、下调MDR-1基因的甲基化水平，上调P-gp的表达。胞质M-CSF通过降低DNMT3b活性和MDR-1基因的甲基化水平，上调P-gp的表达，诱导MCF-7细胞对5-FU和ADR多药耐药。