黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的鉴定及分子检测

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:icqn2007
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黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)是葫芦科重要种传病毒之一,所引起的损失对葫芦科作物生产影响巨大。该病毒属我国潜在危险性有害生物,目前口岸植物检疫部门常有截获,在国内少数地区新近发现。该病毒是通过国际种子贸易、国内的种子调运进行远距离传播。因此,如何快速准确地从进境种子中检测出该病毒是目前急需解决的问题。本研究开展了CGMMV病毒的鉴定及分子检测方法研究等工作,为解决该问题提供了借鉴。主要试验结果如下:(1)以广西南宁一温室的黄瓜病叶为材料,经汁液摩擦接种、透射电镜观察、DAS-ELISA和RT-PCR方法,在该温室黄瓜病叶上检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)。(2)在对RT-PCR反应体系及扩增程序进行了优化的基础上,建立了免疫捕获RT-PCR(IC-RT-PCR)的分子检测方法。我们把该分离物扩增到的CP基因进行T-A克隆,经核苷酸序列分析表明,该分离物CP基因全长为486个核苷酸,编码由161个氨基酸组成、理论分子量为17.3kDa的蛋白,与国内外己报道的CGMMV的CP基因相比,其核苷酸序列的同源性为91.4%~99.4%,其推导的氨基酸同源性为98.8%~100%。(3)设计6对引物,扩增经苋色藜单个枯斑接种葫芦病叶的编码区核苷酸序列。经克隆、测序后,对6段核苷酸序列进行拼接,结果发现该分离物的编码区全长为6188个核苷酸,编码1144个氨基酸。与国外已报道的CGMMV相比,核苷酸序列的同源性为60.1%~98.2%,由此推导的氨基酸同源性为58.4%~99.0%。(4)运用建立的IC-RT-PCR方法直接检测带毒种子,结果发现该方法能从带毒种子中直接检测出CGMMV,比RT-PCR方法操作更为简便,特异性更强。为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法,很有应用前景。
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