猪链球菌2型病理学研究及其双重荧光PCR检测方法的建立

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本实验通过猪体攻毒实验,系统研究了猪链球菌2型引起的病理学变化;并建立了快速、准确检测猪链球菌2型的方法—双重荧光PCR检测方法。试验选用9头30日龄SPF仔猪,分成3组(每组3头),利用中国动物卫生与流行病学中心实验室保存的猪链球菌2型阳性菌株,通过口服、肌注、静注等方法,对试验猪进行攻毒试验,研究猪链球菌2型对健康仔猪各器官的病理学损伤情况。试验结果表明:1.猪链球菌2型能够对健康仔猪有很强的致病作用,其中通过肌注途径进行攻毒实验猪发病明显比其它途径攻毒猪快。2.该菌主要通过黏附、侵袭、毒素等作用,侵害大部分组织器官的细胞而造成损伤。3.主要病理学变化是肺泡壁水肿增宽、聚集了多量的炎症细胞,毛细血管内有大量纤维素性血栓生成;肝细胞变性坏死,肝窦内有纤维素性渗出物;肾小球扩张、出血,肾小管呈大面积坏死;其它器官病理变化并不很严重。运用BEACON Desigener 2.0软件设计了针对CPS2J、MRP的特异性扩增引物和其相应探针(CPS2J用HEX标记,MRP用ROX标记),通过对各个参数的优化选择,建立了能同时检测这两个基因的双重荧光PCR检测方法,运用该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验,并与普通PCR方法进行敏感性比较。结果表明:1.本方法具有特异性好(与其他血清型链球菌和其他病原菌无交叉反应)、敏感性高(最低检测细菌数为24CFU/ml)、稳定性好、重复性高(8个样品在三个不同时期的CPS2J的CT值和MRP的CT值均无显著性差异,P>0.05)等特点,说明该方法是检测猪链球菌2型的可靠方法。2.运用该方法检测从动物攻毒实验所取得的病变组织,显示该方法能够快速、准确地从病料组织中检测出猪链球菌2型。3.从CT值判断该菌在肝脏中含量最高,大脑和心脏的含量相对较低,且同一样品的CPS2J与MRP两个基因的检测CT值基本相同,因此,在生产中可以应用该方法可准确诊断猪链球菌2型。
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