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研究目的:滤泡辅助性T淋巴细胞(Tfh)是CD4+T细胞亚群之一,主要功能是辅助B细胞,它参与生发中心GC的形成,促使高亲和力B细胞分化为浆细胞或记忆细胞,还可以辅助B淋巴细胞产生抗体、辅助抗体类别转换,与多种自身免疫性疾病、免疫缺陷病和感染性疾病的发生发展有密切关系。Tfh细胞持续表达CXCR5、ICOS和PD-1,CXCR5是Tfh迁移和定位的重要“转运分子”,募集Tfh与B细胞汇合并相互作用;ICOS与其受体ICOSL结合并相互作用,促进Tfh细胞的产生和生发中心的形成;PD-1为T、B淋巴细胞表面的负性调节受体,抑制Tfh细胞增殖,在调节因微生物引起的感染性免疫中发挥重要作用。IL-21是Tfh细胞执行效应功能的主要细胞因子,参与机体免疫系统的多方面的调节。本研究拟将Tfh细胞、PD-1、IL-21作为研究目标,分别观察其在肺结核疾病不同阶段的表达规律以及变化趋势,探讨Tfh细胞、PD-1和IL-21的表达在肺结核中的作用。该研究不仅可以揭示Tfh细胞在肺结核病中的免疫学作用和临床意义,更为探索肺结核疾病的诊断和治疗疗效评估提供理论依据。研究内容和方法:本研究所有结核患者均来自天津市海河医院结核科,确诊为初治涂阳肺结核患者(TB组)40例、健康对照组来自体检中心查体胸片以及各项指标均正常的健康人(HC组)40例。肺结核组根据影像检查结果显示累及肺野范围分为多叶受累组(PTB-X3,累及肺野≥3个)16例和病灶局限组(PTB-X2,累及肺野<3个)24例。根据治疗周期末痰涂片结果将TB患者分为痰涂片转阴组(PTB-SN)36例和痰涂片未转阴组(PTB-SP)4例,根据治疗周期末影像学检查结果将TB患者分为病变吸收显著组(PTB-os,病灶缩小程度≥50%)27例和吸收不良组(PTB-s,病灶缩小程度<50%)13例。肺结核组于确诊初治涂阳肺结核用药前、以及治疗周期中2月末、5月末和6月末采集血标本,健康正常人在体检时征得健康正常人同意取血。几组标本分别进行三项检测:1.经提取外周血单个核细胞悬液后进行不同荧光标记的抗体(抗CD4、抗CXCR5、抗ICOS、抗PD-1)染色,采用流式细胞术检测外周血中Tfh细胞比例(CD4+CXCR5+Tfh/Lym cell、CD4+CXCR5+ICOS+Tfh/CD4+CXCR5+Tfh)。2.应用流式细胞术进行PD-1比例(CD4+CXCR5+PD-1+Tfh/CD4+CXCR5+Tfh检测,3.采用ELISA方法对血清中IL-21水平进行检测,操作步骤严格按照ELISA试剂盒的说明书进行。综合性的比对分析Tfh细胞、PD-1、IL-21在肺结核中的表达以及临床意义。研究结果:肺结核组患者外周血单个核细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞、CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞水平与健康对照组相比明显升高,病灶局限组PTB-X2外周血单个核细胞中CD4+CXCR5+Tfh细胞显著低于多叶受累组PTB-X3,差异有统计学意义,两组的CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞之间差异无统计学意义。肺结核组患者外周血单个核细胞中PD-1(CD4+CXCR5+PD-1+Tfh/CD4+CXCR5+Tfh)比例显著高于健康对照组受试者,差异有统计学意义。PTB-X2组PD-1比例显著低于PTB-X3组,差异有统计学意义(P<0.05)。肺结核组患者外周血中IL-21的含量显著高于健康对照组受试者,差异有统计学意义。PTB-X2组外周血IL-21与PTB-X3组相比,差异无统计学意义。PTB-SN组和PTB-SP组的CD4+CXCR5+Tfh在治疗周期中呈下降趋势,组间有统计学差异;两组的PD-1比例总体下降,组间无统计学差异;两组的IL-21未明显下降,组间无统计学差异。PTB-os组和PTB-s组的CD4+CXCR5+Tfh细胞在治疗周期中呈下降趋势,组间无统计学差异;两组的PD-1比例缓慢下降,组间无统计学差异;两组的IL-21未明显下降,组间无统计学差异。结论:CD4+CXCR5+Tfh、CD4+CXCR5+ICOS+Tfh、PD-1及IL-21在肺结核的发病中均发挥免疫学作用。CD4+CXCR5+Tfh和PD-1可作为反映疾病严重程度的指标;CD4+CXCR5+ICOS+Tfh和IL-21不能作为反映疾病严重程度的指标。在治疗周期中CD4+CXCR5+Tfh可作为反映痰涂片转归的指标,不能作为衡量肺结核患者治疗后病变范围吸收程度的指标。PD-1和IL-21不可以作为反映痰涂片转归的指标,亦不能作为衡量肺结核患者治疗后病变范围吸收程度的指标。故监测Tfh细胞、PD-1在肺结核病中的变化,有助于了解肺结核发生发展的阶段,并能够指示肺结核患者治疗的疗效和转归。