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目的:本实验旨在探索一种快速简便的获取大量高纯度雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)的方法,并从神经干细胞(Neural Stem Cells,NSCs)与SCs共培养为出发点,探究共培养后SCs及对NSCs分化方向的影响以及分化后神经元细胞形态学表现。方法:采用治疗浓度为0.25%的中性酶(Dispase)与质量浓度为0.2%胶原酶(NB4)复合酶消化法,消化3-5d龄的大鼠坐骨神经,获取原代SCs,0.25%中性酶纯化传代,S100细胞免疫荧光染色鉴定SCs纯度;诱导分化实验分为三组:SCs组,NSCs组,SCs-NSCs共培养组,分别种植于分化培养基条件下,并于共培养第七天,采用特异性标记物GFAP、Map2免疫荧光染色标记鉴定分化后的细胞(GFAP鉴定星形胶质细胞,Map2鉴定神经元细胞)。结果:通过复合胶原酶与中性酶的方法,可快速获得高纯度SCs;体外共培养分化培养基条件下,共培养组有更多的神经元细胞,而NSCs组则更倾向于向星形胶质细胞分化,SCs组在分化培养基条件下,细胞无分化倾向,细胞性质不变,S100特异性标记物染色阳性。结论:复合酶消化法可以获取高纯度SCs;SCs与NSCs共培养可促进NSCs向神经元的分化。目的:本研究拟采用二维管状带芯编织技术和热定型等工艺制作具有一定弹性和机械强度的导管,以更好地满足桥接周围神经缺损的要求。方法:本研究中,采用带芯编织生物材料神经导管,管状神经导管的内径确定,即等于金属芯棒的外径;生物材料神经导管编织物的表面均匀,不太容易变形。本研究中,选用壳聚糖初生纤维溶解在稀酸溶液中配成质量浓度为3.5%壳聚糖浆液的方法,对生物材料神经导管进行涂层和热定型处理,以使其具有良好的保形性和优良的力学性能,进一步提高其使用性能。我们在本研究中,还在Chitosan-PLGA导管内放置了纵行排列的纳米纤维细丝以使导管具有三维立体结构。这些纳米纤维不仅仅起到了支撑神经导管的管状结构的作用,也模拟了再生神经的体内生长内环境。普通光学显微镜及扫描电子显微镜检查,以观察静电纺丝Chitosan-PLGA神经导管及其内置纳米纤维细丝的物理形态及SCs、NSCs在导管上的生长的形态学表现。结果:静电纺丝Chitosan-PLGA神经导管,导管内径确定,不易变形,内置的纳米纤维细丝对导管起到支撑作用,具有良好的保形性和优良的力学性能;SCs与NSCs可以与这种神经导管良好的黏附。结论:内置纳米纤维细丝的静电纺丝Chitosan-PLGA神经导管模拟神经生长三维立体结构,是一种理想的桥接修复外周神经损伤的生物材料。目的:研究雪旺细胞、神经干细胞与内置纵行排列纳米纤维丝的静电纺丝的细胞相容性,及两种细胞在静电纺丝Chitosan-PLGA导管材料上的黏附及定向生长情况。方法:实验总共分为三组:SCs组,NSCs组SCs-NSCs共培养组,三组细胞分别与Chitosan-PLGA纳米导管材料复合培养于分化培养基。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞在1、3、5、7d存活率情况;倒置相差显微镜下观察各组细胞与静电纺丝Chitosan-PLGA神经导管内置的纳米纤维细丝的黏附生长情况以及扫描电镜下观察共培养组细胞在Chitosan-PLGA上的生长情况及细胞形态学表现。结果:共培养细胞组细胞存活率明显高于SCs组,SCs组又高于NSCs组;倒置相差显微镜下,各组细胞均可与导管内置的纳米纤维细丝很好的黏附生长,且共培养组细胞黏附的更为紧密,细胞数目也更密集;电子扫描显微镜下,SCs及NSCs能很好的沿Chitosan-PLGA内置纳米纤维丝上生长并呈现定向生长的趋势。结论:雪旺细胞及神经干细胞共培养可促进细胞与Chitosan-PLGA材料的相容性;内置纵行排列的纳米纤维细丝有引导细胞定向生长与迁移的作用。