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目的:我们在前期研究中发现,六味地黄膏可促进脑性瘫痪(Cerebral Palsy,CP)患儿生长发育,缩短康复疗程,但缺少分子机制的研究。本实验拟通过建立CP幼鼠模型,检测六味地黄膏摩后幼鼠外周与中枢生长激素释放肽(Ghrelin)、生长激素释放激素受体(Growth Hormone Secretagogue Receptor,GHS-R)蛋白表达的变化,探索六味地黄膏摩促进CP幼鼠生长发育的分子机制,为六味地黄膏发明专利的临床推广奠定实验基础。方法:将108只新生Sprague Dawley(SD)幼鼠按照实验标准严格筛选,剔除雌性及体重偏高或偏低的幼鼠,将符合条件的59只雄性幼鼠随机分为:模型组(n=39)、假手术对照组(n=10)、空白对照组(n=10)。模型组采用左侧颈总动脉结扎联合缺氧法制备脑瘫模型,假手术对照组仅分离左侧颈总动脉不结扎,空白对照组不予处理。将造模成功的SD幼鼠30只随机分为3个亚组:六味地黄膏摩组(n=10)、润肤油对照组(n=10)、模型对照组(n=10)。六味地黄膏摩组和润肤油对照组行推拿干预,六味地黄膏摩组采用六味地黄膏作为推拿介质,润肤油对照组采用市售强生婴儿润肤油作为推拿介质,其余三组不予推拿干预,仅在六味地黄膏摩组和润肤油对照组推拿干预同时与母鼠分笼饲养。相同时间点记录体重、身长、尾长、睁眼时间,进行步态分析、疲劳转棒实验,检测外周血液、中枢下丘脑组织Ghrelin与GHS-R的蛋白表达变化。数据采用单因素方差分析、LSD检验进行统计分析,P﹤0.05时,差异具有统计学意义;P﹤0.01时,差异具有显著统计学意义。结果:1.造模后,采用翻正实验验证造模情况,模型组12.550±5.287s,与假手术对照组(1.340±0.323s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与空白对照组(1.436±0.209s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。2.四周后,六味地黄膏摩组体重114.92±2.79g,与润肤油对照组(99.93±4.43g)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与模型对照组(85.96±3.23g)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(111.71±3.17g)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与空白对照组(111.77±3.68g)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组身尾长30.83±0.61cm,与润肤油对照组(28.78±0.62cm)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与模型对照组(26.50±0.79cm)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(30.75±0.53cm)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(30.71±0.72cm)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组睁眼时间14.2±0.42d,与润肤油对照组(15±1.05d)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与模型对照组(16.4±1.58d)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与假手术对照组(11.9±0.32d)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与空白对照组(11.8±0.42d)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。3.四周后,采用步态分析评定幼鼠运动功能、疲劳转棒实验评定幼鼠平衡能力。六味地黄膏摩组运动速度35.725±1.626cm/s,与润肤油对照组(30.450±1.237cm/s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与模型对照组(24.148±0.701cm/s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(35.909±1.169cm/s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(35.701±0.875cm/s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组支撑时长0.150±0.020s,与润肤油对照组(0.132±0.009s)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与模型对照组(0.112±0.010s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(0.153±0.015s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(0.157±0.008s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组疲劳转棒292.5±14.81s,与润肤油对照组(248.1±80.15s)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与模型对照组(76.6±39.66s)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(300±0.00s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(300±0.00s)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。4.四周后,六味地黄膏摩组外周Ghrelin表达43.155±6.035pg/ml,与润肤油对照组(41.070±2.771pg/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与模型对照组(35.462±4.087pg/ml)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与假手术对照组(39.916±2.935pg/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(39.893±2.325pg/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组外周GHS-R表达8.487±0.457ng/ml,与润肤油对照组(8.079±0.884ng/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与模型对照组(6.745±0.985ng/ml)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(7.863±1.476ng/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与空白对照组(7.873±0.768ng/ml)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组中枢Ghrelin表达与内参蛋白比值1.007±0.222,与润肤油对照组(0.792±0.216)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与模型对照组(0.215±0.111)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(0.487±0.215)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与空白对照组(0.495±0.230)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组中枢GHS-R表达与内参蛋白比值0.562±0.161,与润肤油对照组(0.383±0.118)比较,P﹥0.05,差异无统计学意义。与模型对照组(0.110±0.067)比较,P﹤0.01,差异具有显著统计学意义。与假手术对照组(0.224±0.114)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。与空白对照组(0.221±0.108)比较,P﹤0.05,差异具有统计学意义。结论:1.六味地黄膏摩可以促进CP幼鼠的生长发育,实验结果与前期文献报道一致。2.六味地黄膏摩可以改善CP幼鼠的运动功能和平衡能力,实验结果与前期文献报道一致。3.六味地黄膏摩促进CP幼鼠生长发育、改善运动功能和平衡能力的作用可能通过上调外周及中枢Ghrelin与GHS-R的蛋白表达,最终促进生长激素(Growth Hormone,GH)释放达到。