肿瘤的医源性播散是肿瘤临床诊断和治疗上的难题。长期以来由于检测手段的限制，无法在肿瘤的诊治过程中从血液里稳定地检测肿瘤细胞，因此对医源性播散及其机制缺乏了解。近年来随着巢式RT-PCR和免疫磁性细胞分选等新技术的问世，分离肿瘤患者血中微量的肿瘤细胞、动态观察不同医疗过程中有无肿瘤细胞入血及入血的规律已成为可能。本课题以肺癌为研究对象，观察手术过程中肿瘤细胞有无入血及入血的规律并对其影响因素进行分析，同时从患者肺静脉血中分离并培养播散的肿瘤细胞，观察其生物学活性，为进一步深入的研究打下基础。 本研究首先以CEA-mRNA为检测指标，用巢式RT-PCR技术间接地检测外周／肺静脉血中的肿瘤细胞，分四个采血点（T₁：开胸时、外周静脉；T₂-结扎肺静脉时、外周静脉；T₃：结扎肺静脉时、肺静脉；T₄：结扎肺静脉后1h、外周静脉）采集血液标本，观察手术过程中肺癌细胞的入血情况，分析其入血规律。然后通过免疫磁性细胞分选技术分离出播散的肿瘤细胞并进行培养，对培养成活的肿瘤细胞在鉴定来源的同时进行生物学活性检测，从细胞学角度判断入血肿瘤细胞形成转移灶的能力。实验结果如下： 一、用巢式RT-PCR技术共检测肺癌患者52例，四个采血点CEA-mRNA的检测阳性率分别为：T₁：30.8％（16／52）、T2：53.8％（28／52）、T₃：53.8％（28／52）、T₄：53.8％（28／52）。电泳结果用KODAK凝胶成像分析系统分析，所得参数经正态性和方差齐性检验，均符合参数检验的要求。结果显示T₁以后各采血点CEA-mRNA水平显著升高，其中T₃最高，显著高于其他各点，T₂与T₄间无显著差别。T₁CEA-mRNA阳性者16例，12例T₁为 肺癌术中肿瘤细胞血行播散的检测及意义 摘要 CEA－3RNA阴性者自TZ开始转为阳性；T。、T3、T4阳性者均为 28例，其中鳞癌与腺癌各14例，CEA－InKNA的术中阳性率与肿 瘤性质无关：中央型肺癌的术中阳性率显著高于周围型肺癌， ’I’NM分期较晚者术中阳性率显著高于分期较早者。5例阴性对照 均无阳性发现，经检验该方法的灵敏度为10人 二、用免疫磁珠细胞分选技术共处理血标本5例，所得肿 瘤细胞分别进行培养，成活1例，倍增时间28小时，巳稳定传 代2月。镜下观察细胞异型性明显，经免疫组化证实为上皮来 源，与人肺腺癌细胞系A549相比，其增殖能力和锚着独立生长 能力均较低。 分析以上结果得出结论如下： 1．手术过程中 50％以上的患者肿瘤细胞入血或人血量明显增 加，肺静脉血中CEA－mRNA水平显著高于其它几个采血点，因 此，结扎肺静脉的早晚对肿瘤细胞入血量可能有较大影响； 二．中央型肺癌较周围型肺癌入血肿瘤细胞多，提示术中挤压 对肿瘤细胞入血可能有促进作用，因此术中应尽量避免挤压和其 他不良操作，缩短操作时间；TNM分期较晚者CEA－mRNA水平 较高，提示此时肿瘤更容易出现播散，不仅术中应注意保护，围 手术期还可采用放、化疗等综合治疗以改善预后。 3．术中肺静脉血分离并培养肿瘤细胞的成功是肿瘤细胞血 行播散的确证，细胞学研究发现入血的肿瘤细胞具各良好的生物 学活性，故应采取积极措施避免肿瘤细胞入血。