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DNA甲基化作为一种最重要的表观遗传学修饰,是真核生物重要的表达调控机制,它与生物的生长、分化、发育、调控以及对各种环境因素的响应息息相关。MBD蛋白是能与甲基化DNA特异结合的一类反式作用因子,大量研究表明MBD在植物生长发育过程中起着至关重要的作用。因此,研究MBD在小麦生长调控中的生物学功能具有重要意义。本文在前期获得7aMBD6的三个部分同源基因TaMBD6-A,B,D基础上,克隆得到了TaMBD6完整的ORF与基因组序列,对其序列和结构进行分析。分别克隆了TaMBD6-A、B、D启动子序列,并成功构建了植物表达载体,通过侵染拟南芥分析TaMBD6-A、B、D启动子的表达特性。主要研究结果如下:1、克隆得到TaMBD6三个部分同源基因的完整ORF,序列分析显示在编码区TaMBD6三个序列的差异较小,存在22个单碱基的差异,编码的蛋白质具有9个氨基酸差异。TaMBD6可编码一个446个氨基酸的亲水性蛋白。第9—76位氨基酸为甲基结合蛋白保守域。该蛋白理论的等电点为4.41。丙氨酸Ala、谷氨酸Glu、脯氨酸Pro和赖氨酸Lys含量相对较高,占据了一半以上的氨基酸数量。2、通过荧光实时定量PCR对TaMBD6-A、B、D基因表达特性的分析显示,“京841”春化过程中TaMBD6-A在4 d表达量降至最低,之后波动中缓慢上升。TaMBD6-B的表达量基本处于于波动状态。而TaMBD6-D的表达量总体在上升,在16 d到26 d之间表达量有所下降,且在22 d有一个小的波动。而在种子发育过程中,“洛旱2号”与“豫麦18”两个品种中总体表达都呈现下降的趋势,其中种子发育5 d时的表达量最高,随着种子的发育而表达量迅速降低。两个品种在各自不同的时期表达量有一些特异的变化,但在25 d时都呈现出表达上调。推测TaMBD6-A、B、D在小麦种子发育的过程中通过自身表达量的降低,使以前被抑制表达的基因重新表达,而这些基因可能与种子发育或胚乳形成有着重要的关系。3、在基因组水平上分别克隆小麦TaMBD6 A、B、D上的内含子序列。分析显示,TaMBD6的3个部分同源基因均包含2个内含子,且符合GT-AG的剪切机制。进一步分析发现,TaMBD6-A、TaMBD6-B、TaMBD6-D的第二个内含子大小均为108 bp,且三个部分同源序列基本相同,但第一个内含子的大小分别为3263、3472、3466 bp。其中TaABD6-B和TaMBD6-D间差异较小,而TaMBD6-A与前二者相比差异较大。这三个部分同源基因的第一内含子均在起始密码子ATG下游大约78 bp处,大小均为3 kb以上,作为一个编码区仅有1400 bp左右的基因,此内含子长度占据总长的三分之二,根据近年来的研究,该内含子极有可能参与了该基因的表达调控。4、在TaMBD6-A、TaMBD6-B、TaMBD6-、序列5’端的差异区域设计A、B、D特异性性引物,通过Genome Walking进行三轮巢式PCR,分别得到了1573 bp、942 bp和1302 bp的启动子序列。使用PLANTCA RE对TaMBD6三个同源基因进行分析预测,并结合前期实验室TaMBD6 5’ RACE的研究结果,确定了转录起始位点。结果表明转录起始位点与翻译起始位点之间的距离大约为100 bp之内,3个启动子的TATA box分别在第-21、-21、-23位。三个同源基因的启动子的序列比对分析发现,它们在转录起始位点上游-1到-300 bp区域的序列基本相同。从-300到-750 bp区域TaMBD6-A和TaMBD6-B相似度很高,但是TaMBD6-D与二者的序列差别很大。5、用PLACE软件对TaMBD6-A、B、D启动子序列分析后发现,三个启动子序列均含有多个光响应的元件、激素响应元件和生长素响应元件。我们推测TaMBD6在光响应调节、种子或胚乳发育、脱落酸和茉莉酸甲酯途径中起到重要的作用。6、分别构建了pCAMBIAl301-TaMBD6-A、B、D启动子的植物表达载体,通过农杆菌侵染法转化Col野生型,分别筛选到pCAMBIA1301-TaMBD6-A、B、D的阳性株22棵、9棵、23棵,已收集T1代种子,准备进行下一代的处理观察。这为下一步分析不同光照光强和不同激素刺激条件下,TaMBD6-A、B、D启动子驱动的报告基因GUS在转基因植株的表达奠定了良好的基础。