【摘 要】
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硒(Selenium,Se)是一种重要的微量营养元素。硒缺乏时,多种组织、细胞表现不同程度、不同形式的损伤,细胞凋亡是缺硒性损伤的主要表现之一。MicroRNA是一类高度保守的非编码RNA,它通过结合靶基因的3’UTR区域,使其表达沉默,从而调控相应蛋白的表达。研究发现,机体内硒含量降低后,组织中多种microRNA的表达会发生显著变化。本研究通过人工复制缺硒肉鸡模型,筛选出硒敏感性microRN
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硒(Selenium,Se)是一种重要的微量营养元素。硒缺乏时,多种组织、细胞表现不同程度、不同形式的损伤,细胞凋亡是缺硒性损伤的主要表现之一。MicroRNA是一类高度保守的非编码RNA,它通过结合靶基因的3’UTR区域,使其表达沉默,从而调控相应蛋白的表达。研究发现,机体内硒含量降低后,组织中多种microRNA的表达会发生显著变化。本研究通过人工复制缺硒肉鸡模型,筛选出硒敏感性microRNA,即microRNA-33-3p(miR-33-3p),应用组学方法和相关生物信息学软件,筛选出miR-33-3p的靶基因和可能的信号转导通路,通过双荧光素酶报告基因检测系统、qRT-PCR以及western blot等方法分析筛选并验证miR-33-3p特异性靶基因,以及miR-33-3p在缺硒性肉鸡血管内皮细胞凋亡中作用机制的研究。主要研究成果如下:(1)缺硒性肉鸡静脉内皮细胞出现明显的细胞凋亡特征,包括细胞核发生皱缩,核仁变小,染色质凝集、边聚,细胞内产生大量空泡,内质网断裂、肿胀,且部分核糖体脱离内质网表面,说明缺硒导致了肉鸡静脉内皮细胞凋亡。(2)MiR-33-3p为硒缺乏特异性microRNA,缺硒诱导肉鸡静脉组织细胞中miR-33-3p过表达;通过构建原代静脉内皮细胞miR-33-3p敲低/过表达模型,确认E4F1是miR-33-3p的靶基因。(3)在建立鸡原代静脉内皮细胞miR-33-3p敲低/过表达模型的基础上,发现过表达的miR-33-3p会促进静脉内皮细胞凋亡的发生,而敲低miR-33-3p的表达,细胞凋亡过程受到明显抑制,说明miR-33-3p参与了细胞凋亡的调控。(4)通过检测缺硒肉鸡静脉中内质网应激通路凋亡相关基因的表达,结合体外培养原代静脉内皮细胞转染miR-33-3p后的结果,说明硒缺乏通过miR-33-3p调控E4F1介导的肉鸡静脉内皮细胞内质网应激途径细胞凋亡。综上所述,缺硒会使肉鸡静脉内皮细胞miR-33-3p的表达升高,miR-33-3p通过靶向性地介导其靶基因E4F1影响内质网途径内皮细胞凋亡通路,导致静脉内皮细胞损伤。上述信息为理解硒缺乏导致内皮细胞损伤的机制提供了新的数据资料。
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