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目的:稽留流产(Missed abortion,MA)是流产中的一种特殊类型,随着二胎政策的放开,发病率逐渐升高,目前稽留流产的发病机制尚不十分明确,且缺乏早期预测靶标。有研究认为氧化应激及凋亡可能参与了稽留流产的发生,本研究筛选参与氧化应激,凋亡等多种代谢途径的临床常用血液指标:γ-谷氨酰转移酶(gamma glutamyltransferase,GGT),乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH),腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)和纤维蛋白原(Fibrinogen,FIB),分析其在稽留流产患者及正常妊娠(Normal pregnancy,NP)孕妇外周血中的表达情况,并分析各项指标的诊断价值。同时,检测自噬关键因子Beclin-1及LC3在正常妊娠和稽留流产患者的妊娠组织(绒毛及蜕膜)中的表达情况,探究自噬与稽留流产发病机制之间的关系,为稽留流产筛选预测靶标。通过Beclin-1相关的生物信息学分析,探索其可能涉及的致病机制。方法:1.回顾性分析2014年3月-2017年3月收治的795例稽留流产患者及694例正常妊娠患者其GGT,LDH,ADA和FIB的表达情况,并根据年龄平均分为年龄组1(17-27岁),年龄组2(28-38岁)和年龄组3(39-49岁)。分别统计每一年龄组的表达差异,以了解年龄因素与各指标表达差异之间的关系。应用ROC曲线对各项血液学指标进行分析。2.选取2017年1月-2017年3月收治的36例稽留流产患者作为稽留流产组,同期收治的36例自愿终止妊娠的正常妊娠孕妇作为正常妊娠组。利用HE染色观察两组绒毛及蜕膜组织的特点,利用免疫组化观察Beclin-1在两组绒毛及蜕膜组织中的定位情况,利用RT-PCR检测两组绒毛及蜕膜组织中Beclin-1mRNA的表达水平,利用Western Blot检测两组绒毛及蜕膜组织中Beclin-1蛋白、LC3II/LC3I比值的表达水平。3.应用STRING在线软件绘制Beclin-1蛋白互作网络图,进而应用DAVID在线分析软件对筛选到的相互作用蛋白进行信号通路富集分析,以预测Beclin-1参与的作用机制及可能调控的下游蛋白。结果:1.与正常妊娠患者相比,血清GGT和ADA水平在稽留流产患者中明显增加(GGT:MA:17.68±9.85IU/L;NP:14.57±7.93 IU/L,P<0.0001;ADA:MA:6.05±3.94 IU/L;NP:5.67±3.36 IU/L,P<0.05),血浆FIB水平在稽留流产患者中呈下降趋势(MA:4.31±0.91g/L;NP:4.44±0.96g/L,P<0.01)。血清LDH水平在两组之间没有明显差异(MA:148.05±30.46 IU/L;NP:149.34±27.88 IU/L,P>0.05)。进一步年龄分组发现:ADA与FIB的表达仅在17-27岁年龄组有统计学差异,GGT在各年龄组中均有明显的统计学差异。2.GGT、ADA、FIB、LDH的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.643、0.548、0.539、0.527。3.HE染色显示:与正常妊娠患者的绒毛及蜕膜组织相比,稽留流产绒毛组织的合体滋养层及细胞滋养层明显萎缩变薄,滋养细胞中出现核固缩,绒毛组织出现不同程度的退行性改变,绒毛间质出现纤维样变性。稽留流产患者蜕膜组织的血管数目相对减少,血管腔不规则,表现为组织结构疏松,腺上皮细胞肿胀,腺腔显示不清,蜕膜细胞体积增大,染色较浅,表现出明显的水肿。4.免疫组化显示Beclin-1蛋白在稽留流产绒毛及蜕膜组织中的表达模式呈上调趋势。5.与正常妊娠组相比,Beclin-1 mRNA在稽留流产绒毛(NP:1.00±0.17;MA:1.48±0.24,P<0.001)及蜕膜组织(NP:1.00±0.37;MA:2.30±0.37,P<0.001)中均呈上调趋势,差异有统计学意义。Beclin-1蛋白在稽留流产绒毛(NP:1.00±0.34;MA:2.90±0.60,P<0.001)及蜕膜组织(NP:1.00±0.29;MA:3.00±0.73,P<0.001)中均呈上调趋势,差异有统计学意义。LC3II/LC3I在稽留流产绒毛(NP:1.00±0.27;MA:2.34±0.46,P<0.001)及蜕膜组织(NP:1.00±0.02;MA:1.89±0.33,P<0.001)中均呈上调趋势,差异有统计学意义。6.通过STRING筛选到30个与Beclin-1相互作用的蛋白质,其中下游蛋白ATG14和PIK3C3有至关重要的作用。信号通路富集分析显示,Beclin-1及其相互作用蛋白显著富集在自噬、凋亡、癌症、炎症等途径中。结论:1.与正常妊娠孕妇相比,稽留流产患者外周血中GGT及ADA水平均呈上调趋势,FIB水平呈下调趋势,且均有统计学差异,进一步年龄分组后发现血清ADA与FIB的表达仅在17-27岁年龄组有统计学差异,GGT在各年龄组中均有明显的统计学差异。同时,GGT的ROC曲线下面积最大,诊断价值相对较高,因此GGT有望成为稽留流产可靠的预测靶标。2.Beclin-1 mRNA及蛋白的表达、LC3II/LC3I的比值在稽留流产患者的绒毛及蜕膜组织中均表现为上调趋势,提示细胞自噬参与了稽留流产的发生。3.ATG14和PIK3C3可能是与Beclin-1密切相关的下游蛋白,同其他相关蛋白相互作用构成的网络系统可能作用于细胞自噬、凋亡、肿瘤、炎症等通路,为今后进一步研究Beclin-1在稽留流产中的作用机制提供了方向。