论文部分内容阅读
研究目的:探究清肠化湿方对溃疡性结肠炎模型小鼠的治疗作用及对炎症小体6的调节作用,并从肠黏膜屏障角度探索清肠化湿方对紧密连接蛋白(Claudin-2、Claudin-5)表达的影响,为临床运用清肠化湿方提供更多的科学依据。研究方法:60只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组,美沙拉嗪组,清肠化湿方低、中、高剂量组。除空白组外,其余小鼠置于高温高湿环境、喂养高糖高脂饲料2周,然后饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)蒸馏水1周造成UC湿热证模型。造模结束后给药7d,清肠化湿方低、中、高剂量组小鼠分别予低浓度的清肠化湿方8.125g/(kg·d)、中浓度的清肠化湿方16.25g/(kg·d)、高浓度的清肠化湿方32.5g/(kg·d)灌胃,美沙拉嗪组小鼠予美沙拉嗪溶液灌胃,空白组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。每天观察小鼠的一般情况、体重、粪便性状及隐血情况,进行DAI评分,记录小鼠每小时排出的湿粪粒数以及湿粪重量,取材时测量小鼠结肠长度。取材后,HE染色观察结肠病理情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清白细胞介素IL-1[β(IL-1 β)含量;实时荧光定量(Real-time PCR)法检测结肠 NLPR6、caspase-1、Claudin-2、Claudin-5 mRNA 表达水平。Western Blot法检测结肠核苷酸结合寡聚化结构域样受含pyrin结构域蛋白6(NLRP6)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白(caspase-1)、紧密连接蛋白(Claudin-2)、紧密连接蛋白(Claudin-5)表达水平。研究结果:(1)结肠长度比较:与空白组相比,模型组小鼠结肠长度变短(P<0.01),美沙拉嗪组、清肠化湿方中剂量组小鼠结肠长度变长(P<0.01)。(2)DAI评分比较:与空白组比较,模型组小鼠DAI评分升高(P<0.01),与模型组比较,美沙拉嗪组、清肠化湿方中剂量组DAI评分降低(P<0.01)。(3)显微镜下观察结肠病理切片示:显微镜下观察,空白组结肠结构完整清晰,其隐窝结构完整,杯状细胞未见破坏;模型组主要表现为局部见黏膜糜烂、溃疡形成;清肠化湿方低、中、高剂量与模型组比较,黏膜糜烂、溃疡形成等都有所减轻。(4)ELISA结果显示:与空白组相比,模型组小鼠血清IL-1β 含量升高(P<0.05),与模型组相比,美沙拉嗪组及清肠化湿方低、中剂量组小鼠血清IL-1 β含量降低(P<0.05、P<0.01、P<0.01)。(5)Real-time PCR 结果显示:与空白组相比,模型组小鼠 Nlrp6、Claudin-5 mRNA 表达下调(P<0.05),caspase-1、Claudin-2 mRNA 表达上调(P<0.05,P<0.01)。相较于模型组,美沙拉嗪组、清肠化湿方高剂量组NLRP6 mRNA表达上调(P<0.01、P<0.05),各治疗组caspase-1 mRNA表达均下调(P<0.05),美沙拉嗪组及清肠化湿方中、高剂量组Claudin-2 mRNA表达下调,清肠化湿方中、高剂量组Claudin-5 mRNA表达上调(P<0.05)。(6)Western Blot结果显示:与空白组相比,模型组小鼠Nlrp6、Claudin-5蛋白表达下调(P<0.05),caspase-1、Claudin-2 蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01)。相较于模型组,清肠化湿方中剂量组NLRP6、Claudin-5蛋白表达上调(P<0.05),美沙拉嗪组及清肠化湿方低、中、高剂量组caspase-1蛋白表达减少(P<0.05),美沙拉嗪组及清肠化湿方中、高剂量组Claudin-2蛋白表达减少(P<0.01);研究结论:(1)清肠化湿方能促进UC湿热证小鼠的恢复,改善其肠道病理损伤。其治疗作用可能是通过上调NLRP6蛋白、下调caspase-1蛋白的表达及下调相关的炎症因子IL-1β的表达来缓解肠道炎症反应。(2)清肠化湿方可能通过下调Claudin-2蛋白的表达、上调紧密连接蛋白Claudin-5的表达,恢复肠黏膜功能,从而治疗溃疡性结肠炎。