生物转化法合成糖基抗坏血酸的初步研究

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本文对糖基抗坏血酸的生物合成进行了初步研究,以麦芽糖和VC为底物经α-葡萄糖苷酶作用得到了VC的糖基衍生物-糖基抗坏血酸,主要研究内容包括糖基抗坏血酸高转化率菌株的筛选、发酵条件及培养基组成的优化、糖基抗坏血酸转化条件的优化,以及糖基抗坏血酸高转化率菌株的诱变育种。得到结果如下:从土壤中筛选到一株糖基抗坏血酸转化率较高的菌株WPD2,通过菌落形态和ITS保守区序列分析及基于ITS的系统进化树分析,确定该菌为一株黑曲霉,命名为Aspergillus niger WPD2,同时对转化产物作了初步鉴定,确定转化产物中含糖基抗坏血酸。通过单因素实验、PB实验结合正交实验对Aspergillus niger WPD2发酵条件及培养基组成进行了考察,得到的最佳条件为:接种量为2.0%、摇瓶装液量为30 mL/250 mL、培养温度为34℃、培养时间为60 h、初始pH为7.0、90 g/L的麦芽糖为碳源、10 g/L的(NH4)2SO4为氮源、CaCl2添加量为0.05 g/L,优化后糖基抗坏血酸产量达到0.52 g/L,比优化前提高了40.5%。通过正交实验对糖基抗坏血酸的转化条件进行了考察,得到最佳转化条件为:转化温度40℃、初始pH 2.5、转化时间14 h、VC 5 g/L、麦芽糖2 g/L,优化后糖基抗坏血酸产量达到3.20 g/L,比优化前提高了515.4%。采用亚硝基胍诱变育种,得到诱变菌株Aspergillus niger WPD2-N7-3,其转化产物中糖基抗坏血酸含量达到3.92 g/L,比诱变前提高了22.5%,遗传稳定性实验表明该菌遗传性能比较稳定。
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