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本文采用不同的提取方法提取棉秆蛋白,对影响棉秆蛋白提取率的因素进行了研究,并对棉秆蛋白进行了分离纯化,采用凝胶过滤柱层析和SDS-PAGE对棉秆蛋白分子量的组成情况进行了初步了分析。
棉秆粗蛋白的提取实验主要考虑的影响因素有:pH值、提取剂种类、提取剂浓度、提取温度、提取时间、提取剂体积等。实验中采用的提取方法有NaOH提取法、NaCl提取法、H2O提取法、超声波法、纤维素酶法、表面活性剂法、AUC提取法、乙酸提取法。其中对NaOH提取法、NaCl提取法、H2O提取法进行了正交试验,研究各方法对棉秆蛋白提取率的影响。结果表明,以NaOH为提取剂时,NaOH浓度为0.3﹪,提取温度50℃,提取时间120min,提取剂体积100ml,提取2次,棉秆蛋白提取率可达72.60﹪;以NaCl为提取剂时,NaCl浓度为0.8﹪,提取温度50℃,提取剂体积80ml,提取时间60min,提取2次,棉秆蛋白提取率达到52.03﹪;以H2O为提取剂时,提取温度60℃,提取时间90min,提取剂体积90ml,提取2次,棉秆蛋白提取率达到49.50﹪。本实验采用碱性H2O2法对NaOH提取的棉秆蛋白进行了脱色,研究结果表明,H2O2添加量12﹪,pH值9,脱色时间45min,脱色温度45℃,蛋白得率为94.41﹪,脱色后蛋白呈乳黄色。棉秆蛋白的凝胶过滤柱层析结果表明,上述三种方法提取的棉秆蛋白中不同分子量的蛋白所占比例不同。SDS-PAGE分析结果表明,棉秆蛋白亚基分子量主要分布在20,000Da以下,40,000Da左右,90,000Da以上的三个分子量范围内,并且以分子量在40,000Da左右的一组蛋白亚基所占比例最大,90,000Da以上次之,20,000Da以下最少。