【摘 要】
：
目的:制备灵敏度高、特异性好、亲和力强的烯酰吗啉单克隆抗体,并建立免疫学检测分析方法,为农产品中烯酰吗啉残留快速检测提供技术支撑。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过HAT培养基选择性筛选出融合成功的的杂交瘤细胞。通过ELISA方法从杂交瘤细胞中筛选出阳性细胞,经有限稀释法进行细胞亚克隆,直至亚克细胞稳定分泌抗体,细胞扩大培养、冻存,并制备腹水型单克隆抗体。腹水纯化后对抗体的
论文部分内容阅读
目的:制备灵敏度高、特异性好、亲和力强的烯酰吗啉单克隆抗体,并建立免疫学检测分析方法,为农产品中烯酰吗啉残留快速检测提供技术支撑。方法:取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过HAT培养基选择性筛选出融合成功的的杂交瘤细胞。通过ELISA方法从杂交瘤细胞中筛选出阳性细胞,经有限稀释法进行细胞亚克隆,直至亚克细胞稳定分泌抗体,细胞扩大培养、冻存,并制备腹水型单克隆抗体。腹水纯化后对抗体的特异性、灵敏度、亲和力、效价和亚型等特性进行鉴定。以所得抗体为基础建立烯酰吗啉ic-ELISA和胶体金免疫侧向层析试纸条检测方法,并对方法进行了初步评价。结果:（1）筛到10株稳定分泌抗烯酰吗啉的单克隆抗体杂交瘤细胞株,抗体的灵敏度(IC50)介于5～251ng/m L;所有抗体对烯酰吗啉特异性良好,对所选的9种可能存在干扰的物质无交叉反应;亚型鉴定结果表明10株抗体的轻链均为Kappa（κ）链,其中8株抗体重链为Ig G1亚型,另有2株分别为Ig G2a和Ig G2b亚型。（2）利用抗体（25E6）建立了烯酰吗啉ic-ELISA检测方法,最优条件下,该方法最低检测限(LOD,IC20)为12.5 ng/m L,IC50为50 ng/m L,检测线性范围为12.5-250 ng/m L;该方法精密度较好,添加回收率分析均符合添加标准;利用建立的ic-ELISA方法和LC-MS方法对黄瓜真实样品中烯酰吗啉含量进行了检测,两种方法检测结果具有高度的相关性（R~2=0.9563）,进一步说明建立的ic-ELISA方法具有较高的准确性和可靠性。（3）利用抗体（14E12）初步建立了烯酰吗啉胶体金试纸条检测方法。最优条件下,烯酰吗啉浓度为125 ng/m L时消线效果明显,在31.2ng/m L时检测线显色明显变弱,可以判定为弱阳性。胶体金试纸条对黄瓜真实样本检测结果和LC-MS结果相符合,说明所制备的试纸条具有较高的可靠性和准确性。结论:筛得烯酰吗啉单克隆抗体杂交瘤细胞10株,初步建立了烯酰吗啉的ic-ELISA与胶体金免疫层析检测方法,为开发农产品中烯酰吗啉农药残留的快速检测产品提供了理论依据。
其他文献
中国保险业自1979年复业以来发展迅速,在国民经济中发挥了越来越重要的作用,但中国保险业在发展中也不断遇到新的挑战。现如今,在国际上,贸易保护主义升级,新的国际保险会计准则颁布与实施深刻影响了中国寿险业发展,在国内,经济转向高质量发展,供给侧结构性改革深入推进,中国不断扩大金融业对外开放程度,《银保监会加快落实银行业和保险业对外开放举措》颁布使得中国寿险业面临更加激烈的市场竞争,此外,利率下行的经
尚处于初期发展阶段的建筑供应链管理中,隐性知识的隐匿和流失现象屡见不鲜,建筑供应链特有的弱稳定性特征更是加剧了隐性知识共享不足问题。而隐性知识与建筑创新、过程改进和质量改进密切相关,对建设阶段的决策、延迟管理和降低风险有举足轻重的影响。隐性知识共享不足不仅会通过影响核心企业的学习能力阻碍其核心竞争力的提升,同时也阻碍了建筑供应链节点企业间的协调合作,进而对整个建筑业领域的可持续发展产生负面影响。因
随着市场竞争越来越激烈,顾客的需求越来越丰富多样,企业生产的方式也由过去的单一品种大批量生产转化为现在的多品种小批量生产。因此,在多目标柔性作业车间调度问题中,如果考虑工件批量加工中生产辅助时间的影响,研究结果将会更加接近实际情况,对生产具有更大的指导意义。针对多品种小批量的多目标柔性作业车间调度问题,以最大完工时间最小、总加工成本最小以及最大机器负荷最小为目标,提出了一种博弈人工蜂群算法。该算法
19世纪上半叶是中英关系发生根本转变的时期,英国不断尝试打破中国的朝贡体制,建立西方式的基于主权国家的外交关系,并于1840年发动第一次鸦片战争,逼迫清政府签订条约。中英之间也由朝贡体制下的互市关系转变为新的不平等的条约关系。德庇时是中英关系第一次大转变的见证者,也是这一时期英国对华政策的执行者,亲身参与了第一次鸦片战争前后中英交往的重大事件,在其中不同程度地发挥了作用。政治方面,第一次鸦片战争前
在2020年全面建成小康社会的关键历史节点上实现脱贫攻坚的宏伟目标,既是中国共产党向全国人民郑重承诺的兑现,也标志着中国将迈入全面消除绝对贫困的后扶贫时代。伴随着绝对贫困人口的消失,国家将要从扶贫策略转向防贫与助贫。作为连片特困区的南疆三地州,当地农户往往因自然禀赋不足、人力资本缺乏、公共服务短缺等问题而遭受着多维贫困剥夺。通过A-F方法和多元Logit排序选择模型进行分析,研究对象为三地州696
背景及目的:千金藤碱（Cepharanthine）是从头花千金藤（Stephania cepharantha Hayata）中提取的生物碱,有抗炎、抗癌、抗疟疾、抗病毒等多种活性。它的在很多肿瘤模型上得到验证,但未在前列腺癌中验证。我们以往的研究发现,千金藤碱能降解雄激素受体（Androgen Receptor,AR）,而雄激素受体与前列腺癌发生发展密切相关。千金藤碱是否具有治疗前列腺癌的功效值得
在人口老龄化和健康不平等的时代背景下,研究中老年居民基本医疗保险不同参保群体健康现状和不平等成因,有助于分析健康不平等的成因,为缩小中老年健康差距,改善中老年群体的健康生活质量,评估居民基本医疗保险效用和完善城乡医保统筹机制提供客观依据。首先,本文通过查阅国内外的文献积累相关理论基础,明确健康相关生命质量的概念和测度,并结合健康集中指数作为衡量健康公平性的指标。一方面通过欧洲五维健康量表的调查理念
前列腺癌是男性中常见的癌症类型,也是致男性死亡的第二大恶性肿瘤。苹果多酚（apple polyphenol,AP）作为一种天然生物活性物质,其某些单体成分对一些癌症具有抗肿瘤作用,并且已有研究证明苹果多酚可以抑制乳腺癌细胞的增殖及转移,但在前列腺癌方面几乎没有研究,因此本文主要研究苹果多酚对前列腺癌是否具有抑制作用。希望可以为后续食源性物质特别是多酚类物质作为抗前列腺癌的潜在药物提供新思路。本研究
目的:使用超高效液相色谱与三重四级杆质谱联用技术（UPLC-QqQ-MS/MS）,针对美洛西林原料中的酰氯基因毒性杂质及舒巴坦原料中的两个溴代基因毒性杂质,分别建立灵敏度高、特异性强且准确度高的超痕量分析方法。方法:（1）使用基于规则模型和统计模型的计算机评估系统（Tox Tree及VEGA）对美洛西林及舒巴坦原料中含基因毒性警示结构的化合物进行致突变及致癌性预测,确定需要重点研究的基因毒性杂质及