橙皮素单葡萄糖苷（Hesperidin monoglycoside,缩写为HMG）是高倍甜味剂葡萄糖基橙皮素二氢查耳酮（Glucosyl hesperetin dihydrochalcone,缩写为GHDC）的前体物质,具有抗炎、清除自由基和抗癌等多种药理和生化特性,同时有镇定、提高产量、保鲜、抑制黑色素等多种功效。但因原料橙皮苷溶解性较差,是酶法高值化转化橙皮素单葡萄糖苷的瓶颈。课题组前期研究发现,橙皮苷配位修饰后溶解性和生物活性大幅度改善。本工作旨在提出并实践橙皮苷配合物基础上的橙皮苷酶法修饰新途径,采用脉冲电场法提取陈皮中的橙皮苷,构建绿色交联固定化平台,通过配位-酶解-解配位方法分离提纯HMG,并初步验证制备甜味剂的技术可行性,是HMG高效生物合成的有益探索。主要研究结果如下:一.以橙皮苷提取率为指标,分别考察了液料比、电场强度、脉冲次数和提取时间四种单因素对脉冲电场提取橙皮苷的影响。在此基础上,通过响应面试验建立了回归模型为Y=-446.81+15.23A+250.36B+6.48C+0.66AB-0.016AC-0.095BC-0.13A~2-36.20B~2-0.07C~2,该模型准确度高,可以用来优化脉冲电场辅助提取工艺条件。二.以Fe Cl3和Fe SO4为原料,通过沉淀法合成得到Fe3O4,并与氧化石墨烯（GO）结合得到固定化材料。通过电镜、红外光谱、XRD、热分析以及磁性检测等表征手段研究材料制备前后的结构变化以及磁性性能,结果表明:Fe3O4@GO结晶度较GO有所下降,且Fe3O4@GO有更好的热稳定性,通过磁强计测定的Fe3O4@GO的磁滞回线呈S型,无剩磁和矫顽力,说明Fe3O4@GO具有良好的超顺磁性,可作为良好的固定化酶载体用于下一步实验中。三.探究合成HMG的生物酶解路径,采用绿色交联法合成磁性固定化鼠李糖苷酶酶制剂,并研究了不同条件下鼠李糖苷酶在Fe3O4@GO上的固定化率和酶学性质变化,通过解配位法实现HMG的分离纯化,以及高效液相色谱法（HPLC）、质谱等手段确认产物为HMG。四.采用ABTS自由基清除能力、氧自由基吸收能力（ORAC）对橙皮苷和HMG进行抗氧化活性评价,并研究对α-淀粉酶的抑制能力以及通过CCK-8法研究二者对人乳腺癌细胞MCF-7、肝癌细胞Hep G2和人正常肾细胞293A的增殖作用。结果表明橙皮苷和HMG均有一定的自由基清除能力,综合考虑HMG表现出更佳的抗氧化抗增殖性能和较小的细胞毒性。利用反应釜进行开环氢化,通过液相初步分析了HMG转化合成制备GHDC的方法可行性,为后续甜味剂开发提供思路参考。