Survivin基因转染对骨髓间充质干细胞体外抗调亡能力影响的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Jewellerymay
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目的   单纯未转染干细胞移植体内后生存能力低下严重限制了其增殖及分化能力。本研究旨在研究存活素(Survivin,svv)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)在离体微环境中能否延长其生存能力并探讨其机制,为新的干细胞抗凋亡移植策略提供理论依据。   方法   采用全骨髓贴壁法培养MSCs,取第3代细胞进行试验,同时应用流式细胞技术检测细胞表面标志物CD90、CD29、CD45和CD14;实验分为3组,1MSC组(空白对照组),2空质粒转染MSC组(阴性对照组),3Survivin转染MSC组(实验组),将Survivin转染至MSCs并通过流式细胞仪测定细胞的转染率;采用rt-PCR方法测定细胞内SurvivinRNA表达,Western blot方法检测Survivin蛋白表达;AnnexinV-PI双标法检测去血清诱导后细胞凋亡比例。   结果   培养出的细胞均质性好呈长梭型,经流式细胞仪检测细胞表面高表达间质细胞标记CD90(98.7%)、CD29(97.6%),低表达造血细胞标记CD45(2.2%)、CD14(1.9%);流式细胞仪分析细胞的转染率大于30%,rt-PCR结果显示实验组过表达survivinRNA,Western blot结果显示实验组过表达Survivin蛋白;与对照组比较,实验组对去血清培养后的早期凋亡率明显降低;差异均有统计学意义(P<0.05)。   结论   全骨髓贴壁培养法可以培养出大量骨髓间充质干细胞,转染后MSC可过表达survivin基因及蛋白,并降低MSC的凋亡率。提示脂质体介导的Survivin基因转染对MSC有保护性作用,可增强MSC的抗凋亡能力,延长其存活时间,为体内研究提供了实验基础。
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