偶氮染料的致突变分子机制及其毒代动力学研究

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目的:通过制备偶氮染料毒性物质阳性暴露SD大鼠实验动物模型,利用组织病理学切片诊断技术和免疫组织化学法观察分析,进而探讨偶氮染料对实验动物机体的致突变损害和分子机制;采用液相色谱-串联质谱定量分析技术,开展偶氮染料在动物体内的毒性蓄积、组织分布及毒代动力学研究,对大鼠阳性暴露的损害进行定量评估,为临床上偶氮染料物质暴露污染提供理论基础和实验依据。方法:(1)、通过制备偶氮染料阳性暴露的SD大鼠动物模型,结合病理学石蜡切片HE染色,对染料物质引起的损害进行病理学诊断分析。(2)、采用EnVision免疫组化法检查肝脏和肾脏器官中CYP1A1基因的蛋白表达水平,从分子生物学水平讨论其毒害程度和分子机制。(3)、建立了生物基质中4种染料物质的超快速液相色谱-串联质谱(UFLC-MS/MS)的定量分析方法,并实际应用于实验动物的组织分布、蓄积及毒代动力学的研究分析和定量评估。结果:(1)、偶氮染料阳性处理组的大鼠肝组织均出现了不同程度的空泡症状,细胞间隔变厚,肝细胞脂肪变性,出现了大小不等的脂肪滴;肾脏组织出现程度不同的肾小管上皮细胞变性坏死,细胞界限模糊,对大鼠肝脏、肾脏造成了损伤危害。(2)、偶氮染料对大鼠肝脏CYP1A1表达分析结果显示空白对照组和苏丹染料处理组的平均阳性指数(IHC index)分别为138.89、1651.9、1220.35、490.16、1347.22,肾脏表达的阳性指数分别为17.69、295.68、128.31、196.73、400.33。说明偶氮染料处理组的肝细胞CYP1A1基因的蛋白表达水平明显高于对照组,且具有统计学意义(P <0.01),表明上调了该基因的蛋白表达水平,引起毒性效应和致损伤作用。(3)、针对不同基质的生物样品(血液、器官、组织等)成功建立了液相色谱-串联质谱联用检测法(LC-MS/MS),该方法快速、稳定、低定量限(sub-ppb),适用于偶氮染料物质残留定量测定的实际工作,是生物样品中偶氮染料测定的稳健的定量方法。(4)、在50mg/kg4种苏丹染料的灌胃剂量下,组织分布实验中残留蓄积浓度值最高的是脂肪组织,含量最低的是心脏。(5)、4种偶氮染料分别于灌胃给药0.6046、1.362、4.196、4.341h后,大鼠的血药浓度达到最大值(Cmax分别为630.91、696.26、349.39、1304.61μg/L),在实验大鼠体内的平均半衰期(t1/2)分别为1.208h、2.611h、3.449h、3.411h,药-时曲线下面积值(AUC0-∞)分别为1150.03、2966.66、2706.37、10013.91μg·h/L,表明各种物质在动物机体内的生物利用度高、吸收速度快。结论:偶氮染料阳性暴露对SD大鼠动物机体肝脏和肾脏产生了病理学损害作用,通过上调肝脏和肾脏内的CYP4501A1基因的蛋白表达水平,引起毒性效应和致损伤作用;偶氮染料在动物机体中易在组织器官内产生蓄积,脂肪组织中含量最高,毒代动力学数据表明4种染料物质的半衰期较短,生物利用度高,较易被吸收。
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