论文部分内容阅读
研究目的:TGF-β1是转化生长因子β超家族成员之一,生物体内还是在生物体外都有广泛的生物学功能,但是TGF-β1是通过那些途径及功能来影响牙釉质发育的仍然不清楚,此文的研究目的:通过构建成釉细胞中Tgfb1条件性敲除小鼠模型,观察Tgfb1条件性敲除小鼠牙齿的釉质发育情况,并深入探究TGF-β1在牙釉质发育中的分子机制。研究方法:(1)采用免疫组化的方法利用Anti-TGF beta1验证Tgfb1在小鼠成釉细胞中成功敲除。(2)采用qRT-PCR的方法进一步验证Tgfb1基因在Tgfb1敲除小鼠的磨牙区表达量显著下降。(3)采用SEM及体式显微镜对小鼠牙齿表面形态进行观察。(4)采用Micro-CT对比Tgfb1敲除的小鼠与正常的小鼠牙釉质矿化差别。(5)HE染色对比Tgfb1-cKO小鼠与WT小鼠牙齿组织学差异。(6)再次通过扫描电镜观察小鼠牙齿断面对比Tgfb1敲除小鼠与野生型小鼠釉柱形态及矿化差异。(7)Real-time-PCR验证釉质相关蛋白及蛋白酶在Tgfb1敲除小鼠与野生型小鼠磨牙区的表达差异。研究结果:免疫组化结果发现Anti-TGF beta1在出世后7天敲除型小鼠成釉细胞胞浆中未见表达,且和WT小鼠对比Tgfb1的表达量在敲除鼠中显著下调,说明Tgfb1在小鼠成釉细胞成功敲除;体视显微镜及扫描电镜的结果发现出世后1月龄Tgfb1敲除小鼠的牙釉质矿化不良,微型CT扫描出世后3周小鼠牙齿发现,Tgfb1敲除小鼠的牙釉质矿化度较野生型小鼠牙釉质密度显著降低,但扫描电镜观察出世后2周(萌出前)牙齿结果显示,Tgfb1敲除小鼠牙齿的大小、形态与野生型小鼠无明显差异,说明Tgfb1主要影响釉质后期的矿化,而对早期釉质发育无明显影响。扫描电镜观察出世后1月龄野生型小鼠及Tgfb1敲除小鼠切牙磨片,观察到在敲除Tgfb1的小鼠中釉柱较正常的小鼠釉柱细,且在内层釉柱间可见大量釉质基质蛋白的残余;HE染色结果显示出世后15天小鼠牙齿染色情况,发现此时野生型小鼠的牙釉质间隙中釉质基质已被蛋白酶完全吸收降解,而Tgfb1敲除小鼠牙釉质间隙中仍可见大量的釉质基质残留,成釉细胞的成扁平状;Real-time PCR结果发现Tgfb1敲除后釉质相关蛋白及蛋白酶的表达量在成釉细胞成熟期变化显著,提示Tgfb1在成熟期发挥主要作用。结论:当在小鼠的成釉细胞中将Tgfb1基因敲除之后,小鼠牙釉质表现出了矿化不良的症状,提示在牙釉质发育和矿化过程中,Tgfb1发挥着极其重要的作用。通过进一步的研究发现Tgfb1敲除后主要是通过调节釉质相关蛋白及蛋白酶进而影响釉质矿化。