一种基于细胞技术检测海洋多糖免疫调节活性方法的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:thm99811
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海洋中具有丰富的生物资源,因为海洋环境具备一些的特殊性,所以海洋生物体内的多糖通常具有新颖的结构及特殊的性能。为丰富海洋多糖生理活性的研究,本文以海参水煮液提取物、扇贝裙边及裙带菜孢子叶为研讨对象,进行3方面研究。一方面,利用海参水煮液提取物作用于RAW264.7细胞体系,检测其体外免疫调节活性,抗氧化活性及抗炎活性,从而反映其对免疫体系的贡献。为检测其以上的生理活性,分析经不同浓度海参水煮液多糖处理的正常细胞体系,炎症细胞体系及氧化损伤细胞体系中的细胞吞噬能力、NO释放能力、促炎因子分泌水平、活性氧(ROS)生成、抗氧化酶体系损伤等一系列指标。一方面,提取裙带菜孢子叶多糖并优化其提取工艺进行生产标准化,同时利用所提取的裙带菜孢子叶多糖作用于RAW264.7细胞体系,检测其体外抗氧化活性。另一方面,提取扇贝裙边多糖提取物并确定其主要成分,同时利用所提取的裙边多糖作用于RAW264.7细胞体系,检测其体外抗氧化活性。通过以上3方面的综合,共同反映海洋多糖对免疫体系可能存在的贡献。结果表明,海参水煮液多糖提取物可通过改变RAW264.7细胞的NO释放能力、PGE2释放能力、吞噬能力及iNOS酶活力而进行免疫应答调节,与空白对照相比,最大浓度的海参水煮液多糖提取物使NO释放能力,PGE2释放能力,吞噬能力及iNOS酶活力分别提高了 21.8、6.7、1.2及3.2倍。其次其具备良好的抗氧化作用,包含可缓解因H2O2而构成的细胞氧化伤害,经修复的细胞存活率为氧化损伤时的1.7倍等。其亦具有良好的抗炎作用,包含可降低经LPS诱导炎症的细胞对促炎因子的分泌水平,TNF-α、IL-1β及IL-6分泌程度分别降至LPS单独处理组的0.2、0.2及0.7倍;与LPS单独处理组相比,抑制炎症细胞对NO的释放能力近一半,降低iNOS的酶活力0.83倍,降低了 COX-2的表达能力。为日后开发综合提高免疫力功能食品提供了一定的理论基础和参考方向,有一定的潜在价值。确定木瓜蛋白酶辅助提取裙带菜孢子叶多糖的前处理条件为:过筛目数120目,浸泡时间12 h,浸泡温度50℃。在这样的预处理条件下,木瓜蛋白酶提取裙带菜孢子叶多糖的最佳工艺条件为:酶解时间6 h,酶加量2.45%,液料比79:1,裙带菜孢子叶多糖得率为7.96±0.86%。裙带菜孢子叶多糖具有良好的抗氧化作用,包括可缓解因H202而构成的细胞氧化伤害,降低细胞中ROS及MDA的含量,提高SOD、CAT、GSH-Px的酶活力。所提取的扇贝裙边多糖提取物中主要的活性成分为碳水化合物。扇贝裙边多糖提取物具备良好的抗氧化活性,包括降低MDA、ROS含量,提高SOD、CAT及GSH-Px酶活力。本研究证明以上3中海洋多糖均具有良好的免疫调节活性,可作为辅料或主体芯材被利用,为功能性食品的开发提供了一条新思路。
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