VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架促内皮化和预防支架内狭窄的实验研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jingfei1415
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目的:动脉瘤破裂引起的蛛网膜下腔出血是常见的脑血管疾病,常导致较高的死亡率,而覆膜支架是一种针对复杂动脉瘤的有效血管内重建治疗方法,但目前临床应用的覆膜支架缺乏生物学功能,血管内植入后具有内皮化时间延长的缺陷,并继发平滑肌细胞(Smooth muscle cell,SMC)过度增殖,导致支架内狭窄。本研究旨在设计一种覆盖有静电纺纤维的生物功能覆膜支架,电纺丝纤维膜具有血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和紫杉醇药物(Paclitaxel,PTX)程序化分级释放的功能,实现促进支架早期内皮化的同时,抑制晚期由SMC过度增殖引起的狭窄。进一步的,通过体外实验研究,综合评价该支架的体内外生物安全性能和有效性。方法:利用静电纺丝技术将载有PTX的介孔二氧化硅纳米粒子(Mesoporous silica nanoparticle,MSN)包封在电纺聚乳酸(Polylactic acid,PLA)纤维中,通过聚多巴胺反应将VEGF接枝到纤维膜表面,并将纤维直接纺在支架表面,构成VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架。使用Malvern激光粒度分析仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜等对纳米粒子和电纺丝的形貌进行表征分析。在体外实验中,通过使用紫外分光光度计和高效液相色谱系统(High-performance liquid chromatography,HPLC)分析两种药物释放速率;使用VEGF/PTX分级控释纤维膜培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)和人血管平滑肌细胞(Human vascular smooth muscle cell,HVSMC),并验证新型支架对细胞增殖的影响。采用外科手术方法制备犬颈动脉侧壁囊性动脉瘤模型,并利用介入手段植入VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架,并于术后第1周、第4周和第12周进行数字减影血管造影(Digital subtraction angiography,DSA)随访,分析即刻和中期随访动脉瘤腔的闭塞率和载瘤血管狭窄情况;第1周、第4周、第12周时对实验犬安乐死并从体内获取支架标本进行扫描电子显微镜检查和组织病理学分析。结果:采用纳米电纺丝技术,成功制备了VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架。电纺丝内包裹的MSN-PTX颗粒表面光滑,粒径均匀,直径约为100 nm;电纺丝纳米纤维分布均匀,其直径为1.26±0.64μm,体外实验证实电纺丝加载药物前后其拉伸强度无明显差异(P=0.385);体外药物释放研究显示87.05%的VEGF可在前3天内释放,而前三天内释放的PTX仅占6.8%,99.6%的PTX可在63天内实现稳定持续释放;在体外细胞实验中,VEGF/PTX分级控释纤维膜环境下培养的HUVEC在6天后密度为488%,显著高于对照组的386%(P=0.039),而使用21天浸出液培养6天后HVSMC则增殖为155%,显著低于对照组的303%(P=0.001)。动物实验研究表明,与裸支架相比,VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架改善了即刻和中期随访动脉瘤腔的闭塞率(P<0.05);与不载药覆膜支架相比,新型节段覆膜支架在12周内可显示出更早的内皮化和更低的支架腔内狭窄率(P=0.29)。结论:本研究制备了一种可有效治疗脑动脉瘤疾病的VEGF/PTX分级控释节段覆膜支架,实现了VEGF的早期快速释放,从而促进支架植入早期的内皮化进程,同时通过晚期持续释放PTX,防止发生支架内狭窄,为血管内覆膜支架治疗脑动脉瘤提供了新思路。
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