目的:脉络膜新生血管(choroidal noevascularization, CNV)与眼部许多疾病有关,是引起视力障碍的重要原因之一。近期研究发现,眼部的炎症反应和免疫活化在CNV的发生和发展中起着重要作用。塞来昔布是一种常见的非甾体类消炎药,具有COX-2特异抑制的作用。炎症刺激可诱导COX-2生成,从而导致炎性PG类物质的合成和聚积,尤其是前列腺素,引起炎症反应。塞来昔布可通过抑制COX-2阻止PG类物质的产生,达到抗炎、镇痛及退热作用。本文采用激光建立CNV动物模型,通过观察CNV中TLR4、NF-κB、COX-2和VEGF的变化规律,以及COX-2抑制剂塞来昔布对CNV的抑制作用,从而了解CNV中炎症对新生血管的影响,进一步探讨CNV的发病机制和治疗方法。方法:1实验性脉络膜新生血管中TLR4、NF-κB表达规律的研究1.1 10只健康棕色挪威大鼠,随机分为空白对照组、激光组,激光组以波长647 nm的氪激光(波长647 nm,光斑直径100μm ,功率120 mW,曝光时间0.05s),以视盘为中心围绕视盘均匀光凝9个点,以见到有气泡产生提示Bruch膜被击穿为准建立大鼠CNV模型。1.2激光组大鼠于光凝后7d进行眼底荧光造影(FFA),观察CNV形成情况。1.3两组大鼠分别于光凝后3、7、14、21、30d随机选取一只,处死动物,摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片。常规HE染色及光镜观察CNV的形成情况。并做TLR4、NF-κB免疫组化染色,采用HPIAS-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统测定其染色的平均灰度值,观察这两个因子的表达变化情况。2塞来昔布对实验性脉络膜新生血管中TRL4、NF-κB、COX-2和VEGF表达影响及其意义的研究2.1 BN大鼠15只,随机分为空白对照组、实验对照组、塞来昔布治疗组。治疗组通过灌胃法给药(塞来昔布50 mg/kg,一天两次),1周后实验对照组和治疗组均给予激光光凝(方法同1)建立大鼠CNV模型。各组大鼠分别于光凝后第3、7、14、21、30 d进行荧光素眼底血管造影。2.2造影后6h待大鼠体内荧光素染料大部分被排出,处死动物,摘除一只眼球(另一只眼球用做RT-PCR反应的标本)制作空白对照组球后段组织切片及实验对照组和治疗组的“最大CNV膜”切片。常规HE染色及用免疫组化法分别检测各组TRL4、NF-κB、COX-2和VEGF在脉络膜中的表达。采用HPIAS-1000型高清晰度彩色病理图文分析系统测定其染色的平均灰度值。2.3用上述留取的各组大鼠其中一只眼球进行逆转录聚合酶链反应,来检测上述三组中脉络膜组织TRL4、NF-κB、COX-2和VEGF mRNA变化。结果:1实验性脉络膜新生血管中TLR4、NF-κB表达规律的研究1.1光凝后7 d,FFA光凝斑早期轻度荧光素渗漏,晚期渗漏明显,证实CNV形成。1.2光镜下可见,Bruch膜破裂,在光凝区周围有巨噬细胞浸润,RPE细胞迁移和纤维母细胞增生等,在视网膜下可见完整的CNV管腔。1.3免疫组化结果显示,空白对照组TLR4、NF-κB在脉络膜中的表达比较弱。在激光组中,TLR4、NF-κB随时间的发展,表达呈先上升后下降的趋势。它们均在光凝后3 d明显增加,7 d时达高峰。2塞来昔布对实验性脉络膜新生血管中TRL4、NF-κB、COX-2和VEGF表达影响及其意义的研究2.1实验对照组和治疗组中,两组FFA进行比较,CNV均在第21d时达高峰,但治疗组CNV发生率明显低于实验对照组(P<0.01)。2.2免疫组化结果显示,在实验性CNV中,COX-2、VEGF和TRL4、NF-κB都有明显表达,都随时间的发展,表达先呈上升而后下降的趋势。TRL4、NF-κB在光凝后3 d明显增加,7 d时达高峰;COX-2、VEGF在光凝后7 d明显表达增多,21 d时达高峰。光凝后CNV表达高峰期7 d和21d时,TLR4、NF-κB和COX-2、VEGF在治疗组中比在实验对照组中的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.3 RT-PCR显示TLR4、NF-κB、COX-2、VEGF mRNA表达。在试验对照组和治疗组中,四个基因在转录水平上的表达变化同免疫组化结果类似。结论:1实验性CNV的发病机制有可能是通过TLR4介导产生免疫反应,从而使NF-κB的信号通路活化,诱导血管生长因子的表达。2预防性服用选择性COX-2抑制剂塞来昔布能够有效抑制激光诱导CNV的生成,推测其机制可能是通过抑制NF-κB表达进而抑制上游因子TLR4和下游因子COX-2、VEGF。