党参多糖硫酸酯的制备及生物学活性初步研究

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目的:对洛龙党参多糖的提取、结构改造以及生物活性进行初步探索,同时采用不同分析方法对党参多糖纯化组分进行结构表征,并测定纯化后的多糖含量、糖醛酸含量。采用GC-MS分析党参多糖中的单糖组成。在党参多糖的硫酸酯(SCOP)合成工艺中,选择氨基磺酸作为多糖的酯化试剂,并对酯化后的多糖与未酯化的多糖进行生物活性初步探索,以期为党参多糖的活性研究提供理论依据。方法:采用L9(34)正交设计法优化洛龙党参多糖提取工艺;对提取后的党参多糖初步分离后进行硫酸化结构改造,选择U8(43)均匀设计实验优化党参多糖硫酸酯合成工艺。对硫酸酯化后党参多糖进行了抗病毒作用研究及免疫活性研究。抗病毒研究选择Vero细胞作为体外模型,并探讨其可能作用机制,采用细胞病变效应法(CPE)和MTT法对硫酸化多糖抗HSV-1病毒增殖作用机制进行探讨。免疫学活性研究选择环磷酰胺(CTX)诱导的小鼠造模,取肝脏、脾脏进行免疫学指标考察;骨髓涂片后用Gimesa染色并记录嗜多染红细胞中出现微核的数量,并对病变细胞出现的数目进行统计分析。结果:洛龙党参多糖最佳提取工艺为:温度100℃,加水量为16倍,提取时间为3h,提取次数为2次;经GC-MS分析表明党参多糖COP-4组分,为一种杂多糖,由阿拉伯糖,半乳糖、葡萄糖组成。均匀实验设计优化党参多糖硫酸酯合成工艺为:反应温度60℃,反应时间15min,加入氨基磺酸为0.04mol,硫酸根取代度为0.74;硫酸酯化多糖抗HSV-1病毒的增殖活性结果表明,酯化后多糖对Vero细胞的安全剂量为0.2mg/mL, HSV-1的TCID50为10-8,硫酸化后多糖呈现出良好的抗病毒效果。对昆明种小鼠的免疫学活性考察发现,党参多糖对CTX造模后小鼠有影响,各组小鼠给药后的脏器指数:分子量为3500-10000的小鼠脾脏指数4.26±1.33,胸腺指数为:1.71±0.12;分子量为10000以上多糖给药后小鼠的的脾脏指数为4.59±1.65,胸腺指数为1.92±0.27.结论:(1)洛龙党参多糖的提取工艺表明,党参多糖的最佳提取工艺为:温度100℃,加水量为16倍,提取时间为3h,提取次数为2次;(2)用氨基磺酸法对党参多糖进行硫酸化修饰。确定了党参多糖硫酸酯化最佳工艺条件:温度为60℃,时间15min投料比为1:0.04(g/mol)。(3)硫酸酯化后COP-2多糖能够通过不同途径抑制HSV-1病毒;(4)纯化后党参多糖能够减轻CTX所致小鼠免疫功能抑制。
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