【摘 要】
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背景和目的:急性髓系细胞白血病（Acute myeloid leukemia,AML）异质性高、预后不良、机制不明。环状RNA（circular RNAs,circRNA）具有稳定、半衰期长、组织特异性、进化保守性及多样性等特点,在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。circRNA与AML的关系研究目前仍处于早期阶段,我们前期行基因芯片检测和数据库筛选相结合,筛选出AML过表达circRNA（hsa
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背景和目的:急性髓系细胞白血病（Acute myeloid leukemia,AML）异质性高、预后不良、机制不明。环状RNA（circular RNAs,circRNA）具有稳定、半衰期长、组织特异性、进化保守性及多样性等特点,在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。circRNA与AML的关系研究目前仍处于早期阶段,我们前期行基因芯片检测和数据库筛选相结合,筛选出AML过表达circRNA（hsacirc0003945）,收集临床AML患者骨髓样本和临床资料,并对患者进行随访,检测验证hsacirc0003945表达水平在AML患者中的临床意义,并通过生物学信息学技术对hsacirc0003945的下游mi RNA和宿主基因进行预测,探索hsacirc0003945可能分子机制。研究方法:1.收集5例ALL患者、3例AML患者及3例正常者的骨髓样本,进行circRNA表达谱芯片检测,查询GEO Data Sets数据库,查找相对正常者在AML患者高表达circRNA,两者交集,选择目的circRNA--hsacirc0003945。2.通过q RT-PCR和基因测序技术,进行引物特异性验证、circRNA成环验证和扩增效率验证。3.收集110例AML患者及15例正常骨髓样本,通过q RT-PCR批量检测hsacirc0003945相对表达水平。4.回顾性分析患者年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数、骨髓形态FAB亚型、骨髓原始细胞数、免疫表型、染色体核型、基因突变等临床实验室指标,收集患者诱导缓解、生存等临床资料并进行随访。5.分析hsacirc0003945表达水平与实验室指标的关系,分析诱导缓解率（Complete remission,CR）、总体生存率（overall survival,OS）的影响。6.通过circinteractome、star Base3.0数据库,预测hsacirc0003945下游靶mi RNA及靶基因,构建PPI网络、Hub基因及ce RNA网络,并利用R语言进行GO和KEGG功能富集分析。研究结果:1.筛选出hsacirc0003945作为研究目的基因（相比正常对照上调2.32倍,P＜0.05）。2.hsacirc0003945在AML患者中位相对表达水平为9.19（6.09,16.36）,明显高于正常者7.62（4.06,9.51）（P=0.035）。3.hsacirc0003945作为AML诊断标记物敏感性为45.5%,特异性为93.3%,AUC（area under the curve,曲线下面积）为0.668（95%CI:0.549-0.787,P=0.035）。4.hsacirc0003945表达水平与AML患者性别、年龄、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数及骨髓幼稚细胞比例均无明显相关性。5.hsacirc0003945低表达组诱导CR率为86.7%,高表达组为61.8%,两者比较有显著性差异（c2=5.066,P=0.024）。6.hsacirc0003945低表达组中位生存时间为474.00天（95%CI:205.05天-742.95天）,高表达组中位生存时间为314.00天（95%CI:173.48天-454.52天）,两者中位生存时间无显著性差异（c2=0.403,P=0.525）。7.推测hsacirc0003945可能通过MAPK通路参与AML的发生和发展过程。结论:hsacirc0003945在AML患者中差异高表达;可为AML提供一定的辅助诊断价值;该环状RNA高表达CR率更低,可能参与AML耐药;通过生物信息学技术预测该环状RNA可能通过MAPK通路在AML中发挥生物学作用。
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