论文部分内容阅读
砖红绒盖牛肝菌(Xerocomus spadiceus)在云南分布广,经济价值高,深受人们喜爱。其隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、牛肝菌目(Boletales)、牛肝菌科(Boletaceae)、绒盖牛肝菌属(Xerocomus)。它不仅味道鲜美,兼具抗氧化、抗肿瘤等药用功效。牛肝菌属于外生菌根真菌,与植物共生,其室内纯培养条件下诱导的菌丝体生长缓慢,不会扭结原基,这是人工培养的症结所在。本实验室已能诱导出砖红绒盖牛肝菌小原基,因此本文以该菌种为研究材料,结合前期的转录组测序数据,对其菌丝体、原基、子实体三个发育阶段的差异基因进行分析;通过单样、复合样的多重比较,优选32条差异基因;在此基础上,最终选择3条上调表达基因,利用RT-qPCR技术分别检测其在培养8天、15天的菌丝体、原基中的表达量,并结合它们的数据库功能注释结果预测三个基因在菌丝生长、原基及子实体发育中的作用。这为进一步确定参与原基、子实体形成的候选基因,为子实体发育相关调控基因及其功能的研究奠定基础。主要结果如下:1.对于子实体-vs-原基的差异表达基因集,选取的c20382.graph-c1基因(命名为xs-lectin),上调表达,Pfam数据库注释为真菌凝集素基因;以gapdh基因为内参,RT-qPCR分析表明,培养8天及15天的原基,xs-lectin的相对表达量分别为子实体的675.6、137.2倍;推测该基因参与原基的形态建成。2.选取的c18954.graph-c1基因(命名为xs-hyd 1),在子实体-vs-菌丝体、子实体-vs-原基体的差异表达基因集中,均上调表达,Pfam数据库注释为疏水蛋白基因;以gapdh基因为内参,RT-qPCR分析表明,培养8天及15天的菌丝体,xs-hyd1的相对表达量分别为子实体阶段的207.9、26倍,培养8天及15天的原基,xs-hyd1的相对表达量分别为子实体的337.8、6.5倍,8天时菌丝体及原基的表达量相对较高;推测该基因在菌丝诱导、生长及原基形态建成时都被启动。3.选取的c22444.graph-c7基因(命名为xs-hyd 2),在子实体-vs-菌丝体的差异表达基因集中,上调表达,Pfam数据库注释为疏水蛋白基因;RT-qPCR分析结果,培养8天及15天的菌丝体,xs-hyd 2的相对表达量分别为子实体的5404.7、548.7倍;该基因在菌丝体诱导、生长阶段高表达,推测其与菌丝体生长相关。