新烟碱类杀虫剂在全球杀虫剂市场得到迅猛发展,也是近些年来增长速度最快的一类杀虫剂[1]。其中,以吡虫啉为代表的新烟碱杀虫剂是所有杀虫剂中销售额居首位的品种,成为当前全球最大的一类杀虫剂。新烟碱类杀虫剂以其低广谱、高效、有选择性及对哺乳动物和环境安全,且与大多杀虫剂没有交互抗性等特点,受到了海内外的广泛关注。海内外农药公司分别进行相关的研究用以类似物的开发,除吡虫啉外,已经相继开发上市多种新烟碱类杀虫剂。氯噻啉为近些年来新型研发的新烟碱类杀虫剂,是由我国江苏南通江山农药化工股份有限公司自主研发的第二代新烟碱类杀虫剂。其化学名称为1-（2-氯-5-噻唑甲基）-N-硝基亚咪唑烷-2-基胺（1-（2-chloros-5-thiazolylmethyl）-N-nitroimida-zolin-2-ylideneamine）,在茶园中主要用于小绿叶蝉、黑刺粉虱等有害昆虫的防治。烟碱类农药属内吸性农药品种,在茶树上使用后会被茶树吸收、转运和代谢。目前,国内外有关茶叶中氯噻啉等农药残留的代谢进程、代谢机理、代谢物残留水平、毒性等相关方面的研究比较匮乏。由于氯噻啉等农药在茶树体内的代谢物为痕量水平,在茶叶复杂的基质中直接鉴定的难度较大,而离体悬浮细胞为农药代谢物的研究提供了很好的平台。因此,本实验以氯噻啉等新烟碱类杀虫剂为研究对象,结合植物组织培养技术,通过对茶叶愈伤组织的诱导、愈伤的扩大培养到茶叶愈伤组织的液体悬浮培养,建立起以茶叶悬浮细胞为材料,研究农药代谢物种类鉴定和代谢机理初步研究的平台。主要研究结果如下:1.“龙井43”叶片愈伤组织的诱导:以前期实验为基础,选用“龙井43”无菌株叶片为组织培养的外植体,对其秋冬季茶树叶片愈伤诱导条件进行了优化,采用MS+2,4-D 2.0 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1,p H 5.8为愈伤组织诱导培养基,避光诱导30天,成功建立起茶树叶片组织培养的初代培养条件,愈伤组织质地酥松,颜色嫩白,生长速率高,适合液体悬浮培养。2.“龙井43”叶片细胞悬浮培养条件的优化:以B5+2,4-D 1.0 mg·L-1+KT 0.1 mg·L-1为悬浮液体培养基,装液量40 m L/150 m L（150 m L容量瓶装液40 m L）,称取3 g左右固体愈伤组织,用无菌刀片切碎后加入到培养基中,经过7-10天初代培养,培养条件为25±1℃,120 r·min-1对其继代并更换新鲜培养基的B5+2,4-D 1.0 mg·L-1+KT 0.1mg·L-1液体培养基,继续培养21-28天后再次继代,经过3-4次继代可分离出茶树叶片悬浮单细胞,并且悬浮细胞生长旺盛,代谢活力强,悬浮体系稳定,继代周期缩短,适合农药代谢物的研究。3.氯噻啉在茶树叶片内外的降解动态比较研究:选取长势相同的土培茶苗,分别滴加10μg氯噻啉标准品、10%氯噻啉可湿性粉剂,分别于0天、1天、3天、5天、7天、10天、14天摘取叶片,经过净化处理后,待UPLC-MS/MS检测。结果显示,叶片表面农药残留量在14天内,氯噻啉标准品从7.306μg降低至2.734μg,可湿性粉剂从8.925μg降低至3.836μg;氯噻啉在施药当天叶片即开始吸收,第0天（施药后2 h）茶树叶片吸收氯噻啉标准品0.044μg,吸收10%氯噻啉可湿性粉剂0.057μg,第14天时,茶树叶片吸收氯噻啉标准品含量达到0.212μg,吸收10%氯噻啉可湿性粉剂含量达到0.347μg;在14天内,氯噻啉标准品在叶片表面吸收率为2.12%,降解率62.58%;可湿性粉剂在叶片表面吸收率为3.47%,降解率为57.02%;由此说明,茶树叶片在氯噻啉施药当天即开始渗透吸收;且可湿性粉剂相对于氯噻啉标准品吸收率要高,可能原因为可湿性粉剂含有辅助剂有利于氯噻啉透过叶片蜡质层,从而促进叶片对氯噻啉的吸收。4.茶叶悬浮细胞中氯噻啉的代谢研究:以生长旺盛的茶叶悬浮细胞为材料,添加500μg·m L-1氯噻啉标准品400μL,取样间隔为5天,经过75天代谢实验后,通过HPLC检测,得出氯噻啉在悬浮细胞中的降解趋势图。结果表明,茶叶悬浮细胞并未对氯噻啉产生明显的降解作用,降解率仅为2%左右,通过对样品的初步检测后发现质荷比为198和216的氯噻啉疑似代谢物。5.其他新烟碱类农药在茶叶悬浮细胞中的代谢研究:挑选长势良好、生长活力旺盛且同一批次的悬浮细胞为材料,分别添加500μg·m L-1的噻虫嗪、啶虫脒各400μL至茶树叶片悬浮细胞中（装液量为150 m L锥形瓶装液40 m L）,取样持续时间75天,制样后待HPLC检测,得出两种新烟碱类杀虫剂在悬浮细胞中的降解趋势图。结果表明,在75天内,噻虫嗪降解率为54.24%,啶虫脒没有明显降解作用。