论文部分内容阅读
本文利用生物反应器高密度发酵着重考察了pH和甲醇浓度对表达的影响，并对发酵过程的特征进行初步分析。结果表明诱导相pH为6.5时，rPA的表达量高达487.0mg/l。诱导相最佳甲醇浓度应控制在4‰左右，此时菌体各阶段的平均比生长速率μ分别是0.022h-1，0.015h-1和0.007h-1，rPA表达量达为合成培养基摇瓶表达量的56.4倍。实验发现，当甲醇浓度增加到6‰时，引起酵母细胞中毒，导致细胞形态发生变化。通过Western-blotting方法排除了糖基化问题，发现目的蛋白降解较明显，推测与羧肽酶Y有关。论文还对整个诱导表达阶段的关键酶活进行了测定。并结合其他参数的变化规律，分析诱导阶段各代谢通量的变化及其对表达的影响。根据代谢特征将诱导过程分为四个阶段，依次为甲醇适应期、快速生长期、产物积累期和代谢缓慢期。