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研究背景:健康牙龈结缔组织主要通过非角化的结合上皮牢固地附着在牙齿硬组织上,封闭软硬组织交界处,从而阻止病原体和刺激物渗透到下面的软组织和骨组织。然而,临床探诊、牙周炎、牙周手术、正畸牵引等均会在一定程度上损伤破坏结合上皮,导致牙周附着丧失。结合上皮一侧通过外基板与下方的结缔组织相连接,另一侧通过内基板和半桥粒附着在牙齿上。内基板的主要成分之一是层粘连蛋白332(Laminin 332,LM332),其中LM332的α3链(LAMA3)在调控上皮细胞的迁移、粘附以及半桥粒的形成中具有重要作用。基因治疗是从分子水平研究疾病的新疗法,通过将外源正常基因导入靶细胞从而达到治疗目的,而腺病毒载体是目前基因治疗最为常用的病毒载体之一。研究目的:本研究通过构建过表达LAMA3基因的腺病毒载体,分别进行体内、体外转染实验,探讨其在牙周再附着形成中的作用,为结合上皮在创伤愈合过程中形成稳固的整合提供科学合理的实验依据。研究方法:本研究首先构建LAMA3过表达腺病毒,通过转染人永生化表皮细胞(Ha Ca T)摸索最适MOI值;然后通过细胞粘附、细胞划痕、实时荧光定量PCR、Western Blot、免疫荧光、透射电镜等体外实验对LAMA3过表达腺病毒进行生物学评价;最后通过苏木素-伊红染色、免疫组化、免疫荧光双染共定位、辣根过氧化物酶(HRP)浸润性检测等体内实验研究LAMA3过表达腺病毒在牙周再附着形成中的作用。研究结果:体外实验结果表明LAMA3过表达腺病毒有利于上皮细胞的早期粘附和迁移,能有效提高LAMA3和胶原蛋白17(CollagenⅩⅦ,BP180)的表达,并能诱导成熟半桥粒结构的形成。体内实验结果表明LAMA3过表达腺病毒可以在创伤早期促进半桥粒相关蛋白的表达,以及牙齿-结合上皮界面半桥粒的整合,与Ad-GFP组相比可以有效地减少HRP在牙龈组织中的浸润深度。结论:本研究通过转染LAMA3过表达腺病毒能有效地提高上皮细胞中LAMA3表达,体内外实验结果均表明LAMA3过表达腺病毒有利于上皮细胞半桥粒结构的形成,局部注射LAMA3过表达腺病毒可以增强结合上皮损伤后在牙齿表面的再附着。本实验为形成牢固稳定的牙周再附着提供了新的治疗思路和靶点。