柱层析法提纯天然生育酚的研究

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生育酚是一种脂溶性维生素,因其良好的药理作用、特有的营养价值及稳定的抗氧化性能而被广泛应用于医药、保健品、食品、化妆品及饲料等工业中。目前高纯度生育酚(含量90%以上)国内外市场需求量大,供不应求,因此,高纯度生育酚的提纯工艺研究,不仅具有较高的学术价值,而且也具有广阔的市场前景。本文主要采用柱层析法,以吸附树脂为填充剂,以混合生育酚浓缩物(含量约50%)为原料,对混合生育酚的提纯方法及工艺条件进行了深入研究:1、混合生育酚的HPLC测定方法研究首先建立了混合生育酚的HPLC测定方法,作为在提纯过程中定量测定目标产品的手段。色谱条件为: V(甲醇):V(水)=98:2为流动相,C18柱为固定相,进样量20μL,检测波长为292nm,流速为1mL/min,柱温为35℃。2、吸附树脂的性能研究用静态吸附法测定了混合生育酚在不同树脂上的吸附容量,结果表明:树脂ND-Ⅰ在30℃的静态吸附容量为449.53mg生育酚/g干树脂,35℃的静态吸附容量为371.36mg生育酚/g干树脂;树脂ND-Ⅱ在30℃的静态吸附容量为263.30mg生育酚/g干树脂,35℃的静态吸附容量为191.55mg生育酚/g干树脂。因此,树脂ND-Ⅰ优于树脂ND-Ⅱ。做出树脂ND-Ⅰ的吸附等温线,可知树脂的吸附属于单分子层吸附,是朗格谬尔型。在30℃的回归方程为q=94.07c/(1+0.1988c),饱和吸附容量为458.53mg生育酚/g干树脂;在35℃的回归方程为q=144.85c/(1+0.3934c),饱和吸附容量为371.36mg生育酚/g干树脂;实验发现,不论哪种树脂饱和吸附量都随温度升高而降低,较低温度下有利于吸附,但温度低于30℃时生育酚溶液会发生析出,因此选择实验操作温度为30℃。在内径为20mm,高度为224mm的树脂床层中用动态吸附法测定了混合生育酚在树脂中的吸附曲线和解吸曲线。结果表明:从吸附曲线看,在1.5倍BV时,生育酚在树脂ND-Ⅰ上开始穿透,在3.5BV时生育酚吸附达到饱和,而生育酚在树脂ND-Ⅱ的穿透点出现则很早,在0.2BV时生育酚即开始穿透;从解吸曲线看,生育酚在树脂ND-Ⅰ上最高峰出现在1.6BV处,最高峰处c/c0=2.4,拖尾不严重,而生育酚在树脂ND-Ⅱ上最高峰出现在2.4BV处,最高峰处c/c0=1.2,拖尾严重。综合静态吸附与动态吸附,本实验最终选择树脂ND-Ⅰ作为提纯用吸附剂。3.混合生育酚的提纯工艺研究采用柱层析法以树脂ND-Ⅰ为吸附剂对混合生育酚的提纯工艺进行了研究,以柱温、流速、生育酚浓度、解吸剂选择及解吸剂浓度为主要考察因素,通过吸附实验和解吸实验确定了实验最佳条件选取为:温度30℃,控制吸附流速为2.5mL/min,解吸流速为2.0mL/min;原料液中混合生育酚浓度为10.80g/100mL,5%乙酸-乙醇溶液作解吸剂,可以将生育酚提纯到90%以上,从而得到较纯的生育酚产品。树脂的使用寿命研究表明,树脂每次使用后均需要进行再生处理。树脂再生可以重复使用,循环使用5次后,生育酚含量和收率均在90%以上。在确定的最佳实验条件下,对生育酚的实际样品进行了提纯实验研究,3次实例均表明树脂ND-Ⅰ的处理量为90mg生育酚/mL左右,产品中生育酚的含量可达95%以上,生育酚总收率可达90%以上。
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