【摘 要】
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羊无浆体是经蜱传播的红细胞内寄生的革兰氏阴性菌,是羊无浆体病的病原体。革蜱属的蜱是羊无浆体病的生物学传播媒介。表面蛋白Msp1a、AAAP蛋白、Vir B10和Vir D4蛋白是存在于羊无浆体基因组中的一些重要分子。本研究利用这些分子作诱饵蛋白筛选森林革蜱中肠蛋白,通过酵母双杂交试验研究病原-媒介的相互作用分子机制。将森林革蜱中肠c DNA克隆到p GADT7-Sma I载体(Prey质粒)上构建
【基金项目】
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The National Key R&D Program of China (2017YFD0501200,2018YFD0502305); NSFC (№31502054, №31502091); ASTIP (CAAS-ASTIP-2016-LVRI); NBCIS (CARS-3
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羊无浆体是经蜱传播的红细胞内寄生的革兰氏阴性菌,是羊无浆体病的病原体。革蜱属的蜱是羊无浆体病的生物学传播媒介。表面蛋白Msp1a、AAAP蛋白、Vir B10和Vir D4蛋白是存在于羊无浆体基因组中的一些重要分子。本研究利用这些分子作诱饵蛋白筛选森林革蜱中肠蛋白,通过酵母双杂交试验研究病原-媒介的相互作用分子机制。将森林革蜱中肠c DNA克隆到p GADT7-Sma I载体(Prey质粒)上构建了酵母双杂交文库,将羊无浆体的蛋白克隆到p GBKT7载体中构建成了诱饵质粒,并对酵母菌株Y2HGold中的自身活化和毒性进行了评估。通过载有诱饵质粒酵母菌株Y2HGold和载有捕获质粒的Y187的杂交开展了酵母双杂交筛选。通过在BLAST,Uni Prot,STRING和SMART数据库对捕获质粒序列分析,多个媒介蜱的蛋白包括一个保守的假定蛋白、核糖体蛋白、被膜蛋白UL36、脂肪酸结合蛋白、蛋白二硫化物异构酶3、涂层亚基δ、细胞包膜完整性内膜蛋白、鞭毛生物合成调节剂F1h F、分子伴侣、剂量补偿调节复合物蛋白和非特征蛋白LOC8036454被鉴定为潜在的相互作用蛋白。由于核糖体(RL12)蛋白在核糖体结构的完整性,在大分子生物相互作用和翻译调控中的作用,GST免疫沉降实验进一步证实了Vir D4和RL12之间的相互作用。该研究首次报道了森林革蜱中肠RL12蛋白与羊无浆体Vir D4蛋白的相互作用。功能注释表明RL12蛋白与细胞转化过程有关,Vir D4-RL12相互作用为进一步研究无浆体入侵蜱细胞的分子机制奠定了基础。
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