灵芝,在我国已有两千多年的使用历史,现代医学也证明灵芝具有增强免疫力、抑制肿瘤生长、降血压血脂血糖、抗氧化等诸多功效。多糖被认为是其主要生物活性成分,本实验室以江西赣南人工栽培的黑灵芝为原料,分离纯化得到黑灵芝多糖PSG-1,前期已深入探讨PSG-1对巨噬细胞及脾淋巴细胞的免疫调节作用。本研究通过腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,在组织水平、细胞水平和蛋白水平上,研究不同剂量的黑灵芝多糖对小鼠肠道黏膜屏障损伤及肠道黏膜免疫的影响。现将本研究主要结论归纳如下:1、腹腔注射环磷酰胺导致小鼠体质量减轻,胸腺萎缩,小肠组织黏膜屏障损伤,影响小鼠的消化吸收功能。黑灵芝多糖能够使免疫抑制小鼠体重回升,胸腺指数增加,有利于机体健康的恢复。同时,黑灵芝多糖可以增长绒毛长度,隐窝深度,使得V/C值显著增加。黑灵芝多糖还可以促进隐窝底部的干细胞分化、增殖为小肠杯状细胞,增加肠绒毛表面粘液的分泌量。可见,黑灵芝多糖对小肠黏膜屏障损伤具有一定的修复作用。2、黑灵芝多糖能够促进免疫抑制小鼠小肠中细胞因子INF-α、IL-1β向正常状态的恢复,提高小肠中IgG、IgE、IgM以及血清中sIgA、IgE的释放量,参与机体体液免疫系统调节。此外,黑灵芝多糖还能促进小肠组织中IL-2、TNF-αmRNA基因水平的相对表达。说明,环磷酰胺对正常小鼠肠道免疫环境具有破坏作用,黑灵芝多糖参与肠道免疫环境的调节。3、黑灵芝多糖能够促进小肠组织相关免疫细胞表面的Toll样受体(TLR-2、TLR-4、TLR-6)基因水平的表达,提高小肠T细胞向不同细胞亚群CD4~+T、CD8~+T细胞的分化、增殖,且对CD4~+T细胞影响更大,提高CD4~+T/CD8~+T比值。ELISA法检测小肠组织中Th1、Th2、Th17和Treg细胞分泌的不同类型的细胞因子,Wstern blot法检测小肠组织核转录因子蛋白水平的表达发现:PSG-1可以调节小肠组织不同T细胞亚群(Th1、Th2、Th17和Treg)细胞因子的释放,调节关键蛋白(T-bet、GATA-3、RORγt和Foxp3)的表达,进而可能促进Th1/Th2细胞平衡、Th17/Treg细胞平衡的恢复。最后,采用直接免疫荧光法发现,黑灵芝多糖促进小肠组织IgA分泌细胞的表达,增强主效应因子sIgA的分泌。综合表明,黑灵芝多糖促进小肠细胞分化的可能路径为:免疫细胞表面受体TLRs识别PSG-1的刺激,促进T细胞分化为CD4~+T、CD8~+T细胞,初始CD4~+T细胞在细胞因子等的作用下主要分化为Th1、Th2、Th17和Treg四类T细胞亚群,Th2细胞介导的体液免疫活化B细胞,促进IgA浆细胞的增殖,成熟IgA浆细胞通过分泌s IgA抗体参与肠道黏膜免疫。