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目的和意义:探明填髓通络方对CSVD的治疗作用;阐明填髓通络方对CSVD治疗的作用机制,观察血脑屏障修复与CSVD治疗之间的关系;通过VEGF、ES、脑血管内皮细胞超微结构Occluding、Claudin-1、MMP-2、MMP-9角度观察血脑屏障与CSVD治疗的相关性;为临床采用填髓通络方治疗CSVD认知功能障碍提供依据,为CSVD治疗提供新的思路。研究方法:（1）动物实验分组:选用随机数字表法将36只无特定病原体（SPF级）的脑卒中自发性高血压（SHRsp）大鼠随机划分成高血压模型组、填髓通络方低剂量组、填髓通络方高剂量组四组,其中模型及各治疗组大鼠每组各12只、空白组为12只SD雄性大鼠。（2）造模:因SHRsp大鼠的病理体征及影像学分析与脑小血管病（CSVD）的临床特征高度相似性,所以,其是实验研究CSVD疾病的常用动物模型。SHRsp大鼠作为SHR大鼠中拥有自发性卒中的特性的大鼠常被加以筛选,应用于CVSD的疾病研究,SHRsp大鼠的病理表现主要来源于其体内的交感神经系统和肾素-血管紧张素系统过度兴奋,上述系统的兴奋在早期主要表现血管血压的上升,随着病期的延长可继发性产生脑部的微血管病变,如脑白质病变、脑微出血、腔隙性梗死等微病变[1]。通过实验发现,SHRsp大鼠常在11周龄时收缩压增高＞170mm Hg,此时SHRsp大鼠神经行为改变明显。（3）参照五分制神经行为评分表,神经行为评分1-3分时行脑组织海马体HE染色,大鼠脑组织细胞含量减少,细胞间隙扩大并伴炎性细胞浸润,出现变性、坏死细胞,并可见胶质细胞增生,提示造模成功。（4）灌胃给药,大鼠灌胃给药浓度则参考相关文献,按照人和大鼠的体表面积折算系数换算对应的等效剂量,其中,填髓通络方高剂量组每天给药8g/kg,填髓通络方低剂量组2g/kg。造模成功后第2天开始给药,给药体积按5m L/kg,每天1次,连续给药,模型组、空白组给予等体积的生理盐水。于不同时相对大鼠进行腹腔麻醉,取脑组织以备检测。（5）运用Morris水迷宫试验检测认知能力,运用Western blotting法检测脑组织Occluding、Claudin-1、MMP-2、MMP-9的表达情况,免疫荧光法检测大鼠大脑组织中VEGF和ES表达水平,以评价血脑屏障功能,揭示血脑屏障与CSVD治疗之间的关系。研究结果:（1）CSVD大鼠模型评价:CSVD模型大鼠成功率约为85.7%。（2）Morris水迷宫试验:填髓通络方可改善SHRsp大鼠的认知功能,填髓通络方对SHRsp大鼠逃避潜伏期影响Morris的水迷宫期间,随着训练时间的延长,模型组及填髓通络方各浓度组大鼠的逃避潜伏期呈现逐步降低的现象。而模型组大鼠与空白组大鼠比较,逃避潜伏期的时长明显延长（P＜0.01）,同时与模型组大鼠相比,填髓通络方低、高剂量组大鼠的逃避潜伏期的时间均明显减少（P＜0.01）。（3）免疫荧光法检测脑组织中VEGF和ES平均光密度水平:由实验结果显示,与空白组比较,模型组大鼠脑组织VEGF、ES平均光密度的数值均明显增大（P＜0.01）;与模型组相比,填髓通络方的低、高剂量组VEGF平均光密度的数值均显著增大（P＜0.01）;高剂量组VEGF平均光密度水平升高更加显著,与模型组比较,填髓通络方各剂量组ES平均光密度水平显著降低（P＜0.01）;高剂量组ES平均光密度水平降低则更为明显,其表达差异具有统计学的意义（P＜0.01）。（4）WB法检测各组脑组织蛋白含量:由实验结果显示,与空白组比较,模型组大鼠脑组织MMP2、MMP9含量显著升高（P＜0.01）;与空白组比较,模型组大鼠脑组织Occluding、Claudin-1含量显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,填髓通络方各剂量组MMP2、MMP9含量显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,填髓通络方各剂量组Occluding、Claudin-1含量显著升高（P＜0.01）;高剂量组MMP2、MMP9含量下调更加显著,具有统计学意义（P＜0.01）。高剂量组Occluding、Claudin-1含量升高更加显著,具有统计学意义（P＜0.01）。实验结论和意义:该课题通过对填髓通络方在SHRsp大鼠中的治疗作用机制的研究得出:（1）SHRsp大鼠血压高于170时神经行为改变显著,HE染色改变明显,证明SHRsp大鼠用于CSVD大鼠模型造模成功。（2）填髓通络方能够有效修复CSVD大鼠认知能力。（3）填髓通络方能够有效调控微血管内皮细胞构成蛋白Occluding、Claudin-1蛋白的表达,下调MMP-2、MMP-9表达,进而保护血脑屏障完整性并提高CSVD大鼠认知功能,以实现治疗CSVD认知功能障碍的目的。（4）填髓通络方通过诱导VEGF生成,降低ES蛋白表达水平,改善大脑皮质内皮细胞微观形态。（5）填髓通络方治疗CSVD认知障碍效果显著,且疗效与其浓度呈正相关。综上所述,填髓通络方可从诱导VEGF生成,降低ES蛋白表达角度减轻CSVD损伤,对CSVD认知功能损伤有较好疗效,阐释了填髓通络方缓解CSVD疾病的认知功能障碍的具体作用机制,并为填髓通络方在实际临床缓解CSVD疾病的认知功能损伤提供理论支撑及研究方向,亦为CSVD患者合理应用填髓通络方提供了相关的科学依据。