背景心血管病变是糖尿病患者的主要死亡原因，在全部糖尿病患者中，约80％死于心血管病。1972年Rubler等首先在糖尿病患者中观察到一种特殊的心功能障碍，这些患者无其他通常导致心功能减退的诱因如高血压、冠心病、瓣膜病、先天性心脏病和酗酒等，尸检也无动脉粥样硬化的证据。1974年，Hamby等首次提出了糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopahty，DCM)的概念，并认为糖尿病心肌病变与糖尿病特有的代谢异常有关。其临床特征早期以心脏舒张功能不全、晚期以收缩功能不全为主，容易发生充血性心力衰竭。现在流行病学和分子生物学等越来越多证据表明，糖尿病心肌病已被公认是一个独立的、特异的心肌疾病。近二十余年来，国内外学者对糖尿病心肌病进行了大量研究，虽然取得了阶段性研究成果，但糖尿病心肌病的发生机制仍未完全阐明。深入研究糖尿病心肌病的发生机制，探讨阻断糖尿病心肌病的发病途径对糖尿病心肌病的防治具有深远意义。糖尿病心肌病的发生涉及多种影响因素，心肌细胞代谢紊乱(如葡萄糖、游离脂肪酸代谢紊乱)、微血管病变、心肌自主神经病变、胰岛素抵抗和氧化应激等均促进糖尿病心肌病的发生和发展。临床研究表明，糖尿病心肌病通常以舒张性心力衰竭为早期表现，在糖尿病心肌组织形态学上主要表现为心肌细胞局灶性肥大、坏死，细胞外基质(ECM)沉积和心肌纤维化。以往对心肌细胞的研究较多，近年来心肌间质重构在糖尿病心肌病变中的作用逐渐引起人们的重视，但其详细发生机制尚不明确。Tribbles(TRBs)是新近在果蝇体内发现一种抑制有丝分裂的核基因，目前已知TRBs基因家族包括TRB1、TRB2、TRB3。晚近发现在空腹状态下，db-／db-小鼠(一种基因缺陷糖尿病小鼠)肝脏TRB3的mRNA及蛋白合成显著增高，继而导致空腹状态下肝糖输出增多，血糖水平升高。此外，TRB3 Q84R位点错义多态性不仅和非糖尿病患者胰岛素抵抗相关代谢异常有关，而且和糖尿病患者胰岛素抵抗相关的心血管病危险因素如高甘油三酯血症、体重指数增高等有关。TRB3还可选择性特异调控促分裂原活化蛋白激酶(MAKPs)、NF-ΚB的活性。MAPKs及NF-ΚB信号通路在细胞生长、发育、分裂、凋亡等生理反应过程具有相当重要的作用。MAPKs也是心肌纤维化病理进程中重要的信号转导通路。因此，TRB3可能不仅是糖尿病糖耐量异常的原因，而且可能参与糖尿病心肌病变的发生。然而，TRB3是否参与糖尿病相关并发症如糖尿病心肌纤维化病变的病理生理过程，目前尚无报道。目的1．探讨TRB3在糖尿病大鼠模型心肌中的表达。2．探讨TRB3和糖尿病心肌纤维化病变的关系。方法雄性Wistar大鼠36只，随机分为三组：正常对照组(n=18只)，糖尿病组(n=18只)，正常对照组以标准大鼠饲料喂养，糖尿病组，以高脂高热量饲料喂养。四周后，糖尿病组以腹腔内注射链脲菌素(STZ)30mg／kg，正常对照组大鼠注射等量柠檬酸钠／柠檬酸缓冲液。模型组动物血糖升高后，继续喂养16周。实验过程中，进行以下检测：(1)每隔1周称量体重1次，每隔2周检测空腹血糖1次。(2)分别于注射STZ前、注射STZ后1周、实验末抽血测定空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯、胆固醇，并计算胰岛素敏感指数(1SI)。(3)分别于实验开始前、实验末进行常规超声心动图检查，测定左房内径、左室内径、右室内径、左室射血分数(LVEF)。(4)于实验末记录各组大鼠心电图，以心导管法进行血流动力学检查，测定左室收缩末压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室上升最大速率(dp／dtmax)、左室下降升最大速率(-dp／dtmax)，左室松弛时间常数(T)。(5)心肌组织超微结构和病理学检查。(6)应用Masson染色进行心肌组织间质胶原定量。(7)实时定量RT-PCR法检测TRBs mRNA的表达。结果1．实验动物基本情况：实验过程中大鼠死亡3只，其中糖尿病组2只，死亡正常对照组1只，1只大鼠血糖未达到成模标准，共32只大鼠最终完成实验。其中正常对照组17只，糖尿病组15只。2．三组动物体重及生化指标测定：高脂高热量饲料喂养4周后，与正常对照组相比，糖尿病组大鼠体重明显升高(P＜0.05)，空腹血糖无明显变化((P＞0.05)，空腹胰岛素明显升高(P＜0.05)胰岛素敏感指数(ISI)明显下降(P＜0.01)，血清甘油三醋、血清胆固醇均明显升高(P＜0.05)。STZ注射后1周，与正常对照组相比，糖尿病组大鼠体重无显著差异(P＞0.05)，空腹血糖明显升高(P＜0.01)，空腹胰岛素无显著差异(P＞0.05)；胰岛素敏感指数(ISI)明显下降((P＜0.01)；血清甘油三酷和血清胆固醇明显升高(P＜0.01)。实验末，与正常对照组相比，糖尿病组大鼠体重明显下降(P＜0.01)；空腹血糖仍明显升高(P＜0.01)：空腹胰岛素无明显差异(P＞0.05)；胰岛素敏感指数(ISI)仍明显下降(P＜0.01)；血清甘油三醋和血清胆固醇仍明显升高(P＜0.01)。3．超声心动图监测二尖瓣、三尖瓣返流情况：正常对照组17只动物，均未见二尖瓣或三尖瓣返流；糖尿病组组15只大鼠，轻度二尖瓣返流10只，中度二尖瓣返流5只，重度二尖瓣返流4只，轻度三尖瓣返流4只，中度三尖瓣返流6只，重度三尖瓣返流3只，其中5只二尖瓣、三尖瓣均存在返流，5只二尖瓣、三尖瓣均无返流。正常对照组无瓣膜返流发生，糖尿病组瓣膜返流发生率66.7％，明显高于对照组(P＜0.01)。常规超声心动图指标情况：血糖升高12周后，与正常对照组相比，糖尿病组左房内径明显扩大(P＜0.01)，左室射血分数(LVEF)明显降低(P＜0.05)。实验末，与正常对照组相比，糖尿病组左房内径、左室内径、右室内径均明显扩大(P＜0.05)，LVEF明显降低(P＜0.05)。4．心电图变化正常对照组17只大鼠心电图均基本正常，糖尿病组13只大鼠心电图出现异常，其中10只出现以QRS波正负交替变化为特征的心电图改变，4只出现复杂心律失常(二种以上的心电图异常或宽大畸形的QRS波)。正常对照组无心律失常发生，糖尿病组心律失常发生率86.7％。Fisher检验显示：与正常对照组相比，糖尿病组心律失常发生率明显增加(P＜0.01)。5．血流动力学检测与正常对照组相比，糖尿病组组LVSP明显下降(P＜0.01)，LVEDP明显升高(P＜0.01)，dp／dtmax、-dp／dtmax明显下降(P＜0.01)，T明显延长(P＜0.01)。6．透射电镜观察超微结构的改变正常对照组左室心肌组织细胞排列整齐，心肌细胞质膜连续、完整；粗细肌丝排列整齐，细胞间质可见成纤维细胞和少量胶原纤维；微血管管腔大小正常，内皮细胞结构正常。糖尿病组左室心肌组织细胞排列紊乱，质膜模糊、断裂；肌原纤维呈灶性溶解，肌丝扭曲、断裂，肌节对位不齐；间质可见大量胶原纤维分布；微血管管腔狭窄，内皮细胞肿胀明显，呈柱状向管腔突起。7．组织病理观察：HE染色切片上，正常对照组心肌细胞排列整齐，DCM组心肌细胞排列紊乱，细胞核大小不甚规则，可见肌纤维断裂、排列紊乱。8．Masson染色胶原含量的检测：正常对照组左室胶原组织分布均匀，相邻细胞的胶原纤维网完好；糖尿病组心肌内胶原组织明显增多，围绕心肌细胞的胶原纤维网断裂、排列紊乱。定量分析显示：与正常对照组相比，糖尿病组左室心肌组织胶原含量明显升高(P＜0.01)，相关性分析显示：糖尿病组大鼠的左室心肌组织胶原含量与空腹血糖呈明显的正相关(r为0.746，P＜0.01)。9．实时定量RT-PCR检测TRBs mRNA表达：与对照组比较，糖尿病组大鼠左室心肌TRB1mRNA和TRB2mRNA相对表达量差异无统计学意义(TRB1mRNA:1.5±0.2 vs1.0±0.18，TRB2mRNA:1.37±0.15vs1.0±0.13，P＞0.05)；与正常对照组相比，糖尿病组左室心肌组织中TRB3的mRNA表达增高5.6倍(P＜0.01)。10．两组大鼠左室心肌TRBs mRNA表达水平和血糖水平及左室心肌组织胶原含量的相关性：相关性分析显示：糖尿病组大鼠的心肌组织TRB3的mRNA表达与血糖正相关(r=0.69，P＜0.05)，与心肌组织胶原含量正相关(r=0.67，P＜0.05)。结论1．应用高热量饮食喂饲和小剂量STZ注射，通过超声心动图监测，组织病理检查等技术，成功地建立了符合2型糖尿病代谢特点的糖尿病大鼠模型，为糖尿病心肌病变发病机制的研究提供了可靠的研究模型。2．胶原沉积增加，心肌间质纤维化，是糖尿病心肌病变的主要组织病理变化。3．在大鼠心肌中TRBs各亚族基因均有表达。4．心肌组织中TRB3 mRNA表达与心肌组织胶原含量呈正相关，提示TRB3可能参与糖尿病大鼠心肌纤维化病变过程。背景大量研究显示糖尿病心肌病的主要病理变化包括：心肌细胞肥大增殖、凋亡，以及心肌间质纤维化两个方面。以往认为心肌病变是以心肌细胞的肥大增殖为主。然而80年代以后，许多研究结果表明整个心脏泵功能的异常不仅仅取决于心肌细胞的改变，心肌间质纤维化在糖尿病心肌病发病机制中也起着重要作用。心肌间质纤维化主要包括心脏成纤维细胞的增生和细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)的增生和沉积，心肌组织中胶原含量增高、排列紊乱。ECM是广泛存在于细胞之间的一个动态网状结构，主要由胶原构成，除对细胞起支持与连接作用外，还参与细胞的增殖、分化等多种生理过程，并且处于不断产生与降解的动态平衡中。临床和动物研究观察到，糖尿病心肌胶原沉积，心脏Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维增多，和／或胶原糖基化交联，导致心室壁僵硬度增加，呈现类似限制性心肌病样的改变，早期临床表现为舒张功能障碍。在心肌组织中，非心肌细胞占心脏细胞总数的2／3，在维持心脏的结构和功能方面起着不可忽视的作用。在非心肌细胞中，心肌成纤维细胞约占90％-95％。心肌成纤维细胞是合成和分泌细胞外基质的主要细胞，合成和分泌的细胞外基质合成Ⅰ，Ⅲ和Ⅵ型胶原，弹性纤维和网状纤维以及蛋白多糖等。现已证实，体外模拟糖尿病刺激条件下，成纤维细胞如肾小球间质细胞合成胶原能力增强，但对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响及其机制知之甚少。MAPKs是脊椎动物体内广泛存在的丝氨酸／苏氨酸蛋白调节激酶，是细胞内介导胞外刺激的重要信号系统。MAPKs主要包括：细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N端激酶(c-jun NH2- terminal kinase，JNK)以及P38 MAPK。激活的MAPKs将外界信号传导到细胞核内，参与细胞生长、发育、分裂、死亡以及细胞间的功能同步等多种生理反应的过程。最近的研究显示，糖尿病状态下的高糖-蛋白激酶C(PKC)通路、AGEs、氧化应激、生长因子、渗透压、牵张刺激等都可激活MAPK家族，使转录因子活性增高，参与糖尿病慢性并发症的发生。在糖尿病大鼠模型心肌组织中也发现MAPKs磷酸化水平异常。MAPKs也是调控心肌纤维化过程中重要的信号转导通路。MAPKs信号转导通路在糖尿病心肌病发生发展过程中可能的作用包括：影响细胞增殖、促进ECM积聚、影响AP-1的表达、影响TGF-β的产生，导致胶原合成增加等。本研究动物实验提示，TRB3与糖尿病心肌胶原含量增多相关，尽管目前缺乏充分的证据，但这个结果提示TRB3可能参与了糖尿病心肌纤维化病理生理过程。最近研究表明，TRB3是MAPKs活性重要的调节因子。小剂量TRB3可增强ERK1／2和JNK活性，轻度抑制P38活性。因此，我们提出如下假说：糖尿病状态(如高糖、晚期糖基化终产物等刺激)条件下引起心肌成纤维细胞TRB3表达提高，并通过MAPKs信号转导通路促进心肌成纤维细胞合成胶原，最后导致心肌纤维化，引起心肌舒张功能障碍。目的1．高糖对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响；2．MAPKs信号通路在高糖对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响中的作用；2．TRB3在高糖刺激对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响中的作用及其信号转导机制。方法本研究以原代培养的新生大鼠心肌成纤维细胞为研究对象。采用细胞免疫组织化学、实时定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)，蛋白免疫印迹(western blotting)、酶联免疫吸附(ELISA)等实验方法，分别观察：1．在体外模拟糖尿病状态，分为高糖组、高渗组、低糖组，即分别给予葡萄糖(25mmol／L)、甘露糖(25mmol／L)、葡萄糖(5.5mmol／L)孵育心肌成纤维细胞后，检测TRB3 mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白含量；2．高糖组、高渗组、低糖刺激心肌成纤维细胞后，观察MAPKs信号分子p38、ERK1／2、JNK磷酸化的变化；3．根据高糖对心肌成纤维细胞MAPKs磷酸化水平的影响，给予相应MAPKs抑制剂后，高糖对心肌成纤维细胞胶原合成的影响；4．设计、化学合成TRB3 siRNA，采用脂质体转染大鼠心肌成纤维细胞以抑制TRB3表达后，观察上述刺激条件下，大鼠心肌成纤维细胞MAPKs信号通路p38、ERK1／2、JNK磷酸化水平，以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白含量的变化。结果1．分别以高糖、高渗、低糖条件孵育心肌成纤维细胞0h、4h、8h、12h、24h、48h、72h。在12h内，高糖时间依赖性刺激心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA合成，12h达到峰值，分别为低糖对照组的4.62倍和2.57倍(P＜0.01)，其后逐渐降低，但仍高于对照组。分别孵育心肌成纤维细胞24h、48h、72h，培养液蛋白含量增高逐渐增高，72 h时Ⅰ型胶原蛋白浓度为低糖组4.55倍(P＜0.01)，Ⅲ型胶原蛋白浓度为低糖组1.78倍(P＜0.05)。而高渗组对Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白合成仅轻度增多，差异无统计学意义。高糖引起心肌成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA表达在12h内持续增加(Fig．1B)，但峰值表达量低于Ⅰ型胶原(分别为1.7倍和3倍)。高糖培养心肌成纤维细胞24h-72h，培养液中Ⅲ型胶原蛋白含量持续上升(P＜0.01)，72小时表达量低于Ⅰ型胶原(分别为2.4倍和3.9倍)。说明高糖促进Ⅰ型胶原合成作用较其对Ⅲ型胶原合成作用强。2．高糖刺激0min、30min、60min、120min，高糖刺激30-120min，ERK1／2磷酸化水平呈时间依赖性提高，120min达到峰值水平(P＜0.01)。在0 min、30 min、60 min、120 min，磷酸化ERK1／2与总ERK1／2比值分别为：100、125、214、269；高糖对心肌成纤维细胞p38和JNKs磷酸化水平的无明显影响。3．PD98059可抑制高糖引起的Ⅰ型胶原mRNA水平(12h)下降至36.7±9％，Ⅲ型胶原mRNAmRNA水平(12h)下降至58±10.6％(P＜0.01)；培养72小时，培养液中Ⅰ型胶原蛋白表达水平下降55.6±12.4％(P＜0.01)，Ⅲ型胶原蛋白表达水平下降57±9.7％(P＜0.01)。4．高糖对心肌成纤维细胞TRB3mRNA表达的影响在12h内，随着培养时间的延长，高糖引起心肌成纤维细胞TRB3 mRNA表达水平逐渐增高，至12h提高5.78倍(P＜0.01)；培养时间延长至12h-72h，高糖引起心肌成纤维细胞TRB3 mRNA表达水平呈逐渐下降趋势，但仍高于低糖对照组和高渗对照组(P＜0.01)。低糖培养基和高渗培养基对TRB3 mRNA表达水平没有明显改变。提示高糖促进TRB3mRNA的合成，且这一作用与高糖引起的高渗环境无关。5．筛选最佳抑制效果TRB3 siRNA抑制TRB3表达后，高糖刺激心肌成纤维细胞12h，Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA分别降至对照组的47％和58％(P＜0.01)，高糖刺激心肌成纤维细胞72h，蛋白合成量也分别降至对照组的38.7％及72.3％(P＜0.01)。结论1．高糖通过ERK1／2MAPK信号转导通路促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的合成；2．高糖是TRB3的刺激因子之一；3．TRB3通过ERK1／2MAPK信号转导通路参与高糖促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的合成代谢。背景晚期糖基化终产物(Advanced glycation end products，AGEs)是指蛋白质、核酸或脂质等与大分子物质的氨基在不需酶参与条件下，能自发地与葡萄糖或其它还原糖的醛基或酮基反应所生成的稳定的共价化合物。它的形成一般是伴随糖尿病(可能还有炎症)的一种重要的生化异常，并参与了糖尿病诸多并发症的发病机制，如糖尿病动脉粥样硬化、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病等。近年来研究发现，AGEs通过多方面影响糖尿病心肌病变的发生发展，导致心肌舒张功能降低AGEs不仅通过交联作用影响心肌功能，而且增加心肌间质胶原合成，促进糖尿病心肌纤维化的进程。本研究第二部分发现，高糖可以促进ERK1／2的活化而引起心肌成纤维细胞合成工型胶原和Ⅲ型胶原增加。AGEs作为长期高糖条件下的非酶糖基化产物，是高糖发挥病理生理作用的重要中间物质，和高糖生物学作用有很多相似之处。在许多间质成纤维细胞，AGEs都具有促进胶原表达的作用。故本研究推测，AGEs可能通过影响心肌成纤维细胞合成胶原，导致心肌纤维化。MAPKs是调节细胞增殖和蛋白合成的一个重要细胞内信号转导系统，它也是心肌组织纤维化过程中重要的调节因素。糖尿病状态下的高糖、AGEs、氧化应激、渗透压等刺激都可激活MAPKs家族，最终导致糖尿病慢性并发症的发生。有研究证实早期糖尿病大鼠心肌纤维化同时伴有ERK1／2活性增高，提示MAPKs信号转导通路也可能参与了糖尿病心肌纤维化的病理生理过程。体外研究观察到，AGEs促进心肌成纤维细胞MAPKs的磷酸化和其它成纤维细胞MAPKs信号通路，然而，MAPKs信号转导通路在AGEs对心肌成纤维细胞胶原合成的影响中的作用尚不清楚。TRB3是晚近在果蝇体内发现一种抑制有丝分裂的蛋白激酶，TRB3可能不仅是糖尿病糖耐量异常的原因，而且作用于MAPKs及NF-ΚB等信号通路，在细胞生长、发育、分裂、凋亡等生理反应过程具有相当重要的作用。在本研究前期实验发现，TRB3和糖尿病心肌胶原含量呈正相关，它可通过调控ERK1／2的磷酸化水平参与高糖刺激心肌成纤维细胞合成Ⅰ型和Ⅲ型胶原的作用。因此，本研究提出如下假说：糖尿病心肌组织中AGEs可能通过对TRB3的刺激作用，调控MAPKs信号转导通路的活性，最终引起胶原合成的异常，导致糖尿病心肌纤维化。目的1．AGEs对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响。2MAPKs信号转导通路在AGEs对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响中的作用。3．AGEs对心肌成纤维细胞合成TRB3表达的影响。4．TRB3在AGEs刺激对心肌成纤维细胞合成胶原功能的影响中的作用及信号转导机制。方法1．在体外模拟糖尿病状态，给予AGEs处理新生大鼠心肌成纤维细胞后，检测TRBs mRNA表达水平以及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白含量；2．AGEs刺激心肌成纤维细胞后，观察MAPKs信号通路p38、ERK1／2、JNK磷酸化的变化；给予p38抑制剂SB203580、ERK1／2抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125后，AGEs对心肌成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成的影响；3．同时构建TRB3 siRNA，转染大鼠心肌成纤维细胞以阻断TRB3表达后，观察上述刺激条件下，大鼠心肌成纤维细胞MAPKs信号通路p38、ERK1／2、JNK磷酸化水平，以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白含量的变化。结果1．AGEs对心肌成纤维细胞合成Ⅰ型和Ⅲ型胶原的影响AGEs刺激心肌成纤维细胞0h-72h，Ⅰ型胶原mRNA合成增加，12h达到高峰，为BSA对照组的6.47倍(P＜0.01)；在72h内，培养液Ⅰ型胶原蛋白含量逐渐增高，AGEs组72h时上清Ⅰ型胶原蛋白浓度为BSA对照组的3.62倍(P＜0.01)。AGEs抑制Ⅲ型胶原mRNA的表达，12h时AGEs组Ⅲ型胶原mRNA较BSA对照组下降的16.5％，AGEs组72h时培养液中Ⅲ型胶原蛋白浓度为BSA对照组的53.1％(P＜0.01)。2．AGEs对心肌成纤维细胞MAPKs信号转导通路活性的影响AGEs刺激后，心肌成纤维细胞ERK1／2和JNK磷酸化水平均增高，且在30min达高峰，和对照组比较，磷酸化水平分别提高2.39倍和1.57倍(P＜0.01)，而p38磷酸化水平逐渐降低，在60min时p38磷酸化水平降至对照组的83％(P＜0.05)。3．MAPKs信号转导通路在AGEs对成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原合成的影响给予ERK1／2抑制剂，AGEs对成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA合成减少62％(P＜0.01)和13％(P＜0.05)，Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量分别减少50％(P＜0.01)和24.5％(P＜0.05)；给予p38抑制剂后，AGEs对成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA合成减少22％(P＜0.05)和33％(P＜0.01)，蛋白含量分别减少16.9％(P＜0.05)和53.7％(P＜0.01)；JNK抑制剂使AGEs对成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA合成减少19％(P＜0.05)和5％(P＞0.05)，Ⅰ型胶原蛋白浓度减少19.4％(P＜0.05)，但Ⅲ型胶原蛋白浓度提高10.6％。4．AGEs对心肌成纤维细胞TRB3mRNA表达的影响AGEs刺激后8h，心肌成纤维细胞TRB3mRNA表达达到峰值，较刺激前提高21.3倍，为BSA对照组的4.53倍(P＜0.01)。5．RNAi抑制TRB3表达后，AGEs对心肌成纤维细胞MAPks活性的影响采用siRNA抑制TRB3表达后，与刺激前比较，30min时AGEs组ERK1／2和JNK磷酸化水平分别降低38％(P＜0.05)和46％(P＜0.01)；与刺激前比较，60min时AGEs组p38磷酸化水平活性提高53％(P＜0.01)。6．RNAi抑制TRB3表达后，AGEs对心肌成纤维细胞合成Ⅰ型和Ⅲ型胶原的影响采用siRNA抑制TRB3表达后，AGEs刺激成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达水平分别减少74％(P＜0.01)，Ⅲ型胶原mRNA表达增加25％(P＜0.05)；Ⅰ型胶原蛋白浓度减少65.8％(P＜0.01)，Ⅲ型胶原蛋白浓度升高23.1％(P＜0.05)。结论1．AGEs促进心肌成纤维细胞TRB3的表达；2．ERK1／2、P38、JNK信号转导通路均参与AGEs促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原表达，其中ERK1／2起主导作用；3．ERK1／2、P38信号转导通路均参与AGEs促进心肌成纤维细胞Ⅲ型胶原表达，其中P38起主导作用；4．AGEs促进ERK1／2、JNK磷酸化，抑制P38磷酸化，总体效应为促进心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原的表达，下调Ⅲ型胶原的表达5．TRB3通过特异性调控MAPKs信号分子活性：促进ERK1／2、JNK磷酸化，抑制P38磷酸化，参与AGEs对心肌成纤维细胞胶原表达的影响。