【摘 要】
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目的探讨NF-κB通路在调节口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移和侵袭中的作用及其对上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)表达的调控。方法首先,在SCC-15细胞中研究LPS对NF-κB通路的激活机制。采用WB技术、q RT-PCR技术和细胞免疫荧光技术,检测IκBα蛋白、p65磷酸化蛋白和促炎因子IL-6
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目的探讨NF-κB通路在调节口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)迁移和侵袭中的作用及其对上皮膜蛋白1(epithelial membrane protein 1,EMP1)表达的调控。方法首先,在SCC-15细胞中研究LPS对NF-κB通路的激活机制。采用WB技术、q RT-PCR技术和细胞免疫荧光技术,检测IκBα蛋白、p65磷酸化蛋白和促炎因子IL-6、COX-2 mRNA表达水平及p65蛋白核染色情况。继而采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测LPS诱导下SCC-15细胞迁移和侵袭水平。接着采用WB技术检测LPS诱导下EMT标记物E-cadherin、Vimentin和ZEB2蛋白表达水平。同时检测NF-κB通路抑制剂BAY11-7082对以上指标的影响。最后,进行NF-κB通路调节EMP1的实验研究。采用q RT-PCR技术和WB技术检测LPS诱导下EMP1 mRNA和蛋白表达。使用BAY11-7082和COX-2选择性抑制剂NS-398预处理并经LPS诱导后再次检测EMP1 mRNA和蛋白表达。结果用LPS诱导SCC-15细胞后,发现IκBα蛋白在4h-8h内明显下调(P<0.05),IκBαmRNA在4h-6h内明显上调(P<0.05),提示IκBα的降解激活了NF-κB通路,并以再合成的方式负反馈调节NF-κB通路的活性。LPS以时间和剂量依赖性上调p65磷酸化蛋白的表达水平(P<0.05),提示p65的磷酸化在NF-κB通路活化中是必要的。同时,p65增强的核染色及促炎因子IL-6和COX-2 mRNA的显著上调(P<0.05),进一步提示了NF-κB通路的激活。接着还发现LPS诱导下SCC-15细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.05),此时的EMT上皮标记物E-cadherin明显下调,而间充质标记物Vimentin和ZEB2蛋白明显上调(P<0.05)。在经BAY11-7082预处理后,LPS诱导的IκBα蛋白降解和p65核易位受到抑制,同时还显著抑制了SCC-15细胞迁移和侵袭能力(P<0.05)。提示BAY11-7082抑制了LPS诱导的NF-κB通路活化。此外,LPS诱导可显著上调EMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且呈浓度依赖性。经BAY11-7082和NS-398预处理后,抵消了LPS诱导下的EMP1含量变化,提示NF-κB通路和COX-2调节了EMP1表达。结论在OSCC迁移和侵袭过程中,NF-κB通路起到明显的促进作用,其促进机理可能和EMT过程发生有关。BAY11-7082可以抑制LPS诱导的OSCC迁移和侵袭性,提示BAY11-7082可能作为治疗OSCC转移的小分子靶向抑制剂。此外,EMP1可能受NF-κB通路和COX-2的调节。
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