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研究背景恶性黑素瘤被认为是恶性程度极高、侵袭性极强的肿瘤,尽管治疗方法多样,但结果并不理想,因此寻求有效的治疗方法十分必要。雷公藤内酯醇作为免疫抑制剂已被证明可以诱导人黑素瘤A375细胞的凋亡。研究表明雷公藤内酯醇可通过多种信号途径诱导肿瘤细胞的凋亡,其中也包含内质网应激。内质网介导的凋亡通路是近年来发现的新的细胞凋亡通路。CHOP被认为是内质网应激的主要标志性分子,其表达量显著上升是引起内质网应激性凋亡的三大机制之一。本研究旨在探讨CHOP依赖的内质网应激性反应在雷公藤内酯醇诱导人黑素瘤A375细胞凋亡的可能及作用机制。目的1.检测雷公藤内酯醇对人黑素瘤A375细胞凋亡及增殖的影响,并研究雷公藤内酯醇能否引起内质网应激的发生。2.研究内质网应激标志性分子在雷公藤内酯醇干预黑素瘤A375细胞后的变化趋势,探讨雷公藤内酯醇引起细胞凋亡的新的作用机制,为黑素瘤的治疗提供新的选择。方法培养人黑素瘤A375细胞系,按照浓度梯度(OnM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM、200 nM)加入雷公藤内酯醇24h。利用光学显微镜观察药物作用后细胞形态改变;CCK8法检测对A375的增殖抑制作用:流式细胞术检测细胞的凋亡;WesternBlot印迹法观察GRP78、p-PERK、PERK及CHOP蛋白的相对表达量;同时测定雷公藤内酯醇作用48h、72h后GRP78蛋白的变化趋势;qPCR检测各组细胞内质网应激相关分子GRP78、PERK、CHOP mRNA的相对表达量。结果1.雷公藤内酯醇作用24h后,随着浓度的增高,细胞数目逐渐减少,细胞变细长的梭形,并且随着作用时间的延长,逐渐变圆形或类圆形。2.与阴性对照组比较,12.5nM、25nM、50nM、100nM、200nM雷公藤内酯醇作用细胞24h、48h、72 h后均对A375细胞有增殖抑制作用,且与浓度、时间有依赖性,有统计学差别(P<0.05),雷公藤内酯醇对A375细胞24h、48h、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别约为308nM、83nM、55nM。3.雷公藤内酯醇干预A375细胞24h后,随着药物浓度的增加,细胞的凋亡率逐渐增加,有统计学意义(P<0.05)。4.WesternBlot结果显示雷公藤内酯醇可以诱导内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、PERK及CHOP表达升高,且随着药物浓度的增加而上升,差异有统计学意义(P<0.05)。5.延长雷公藤内酯醇的作用时间,GRP78蛋白表达量逐渐减少。6.qPCR显示,雷公藤内酯醇作用A375 24h后,GRP78、PERK、CHOP各自mRNA的相对表达量上调,且随药物浓度的增加而增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.雷公藤内酯醇可以引起人黑素瘤A375细胞内质网应激的发生。2.雷公藤内酯醇通过CHOP依赖的内质网应激性凋亡途径诱导人黑素瘤A375细胞系的的凋亡。