人参果中人参皂苷分离技术及提取物HPLC指纹图谱研究

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为了深入开发利用人参果资源,本文应用现代植物化学分离手段,研究了人参果中人参皂苷大孔吸附树脂提取和高速逆流色谱分离;在此基础上,对其部分化学成分进行分离及结构鉴定研究。为人参果资源的高效开发及可持续利用奠定理论及方法学基础。本项研究取得了如下进展:1.首次应用高速逆流色谱(HSCCC)对人参果中人参皂苷进行了制备性分离。以乙酸乙酯-正丁醇-水(1:6:7,下相)为溶剂系统,主机正转,转速900r/min,流速2mL/min,固定相保留率40%,人参皂苷Re保留时间为200~230min,所得人参果皂苷Re经HPLC分析,纯度达到98.84%。2.对人参果皂苷大孔吸附树脂吸附提取工艺进行了研究,采用高效液相色谱法以Re、Rg1、Rb1、Rc、Rd和Rb2作为对照品,6种人参皂苷总和作为指标对AB-8、D-101、HPD300、HPD400、HPD500、HPD450和HPD700型大孔吸附树脂进行了比较,对比了筛选出适合于人参果中皂苷富集的HPD400型大孔吸附树脂,同时也对HPD400型大孔吸附树脂的洗脱系统进行了研究。3.采用超声提取结合大孔吸附树脂层析柱、硅胶中压柱色谱对人参皂苷化学成分进行了分离制备。大孔吸附树脂洗脱部分进行常规柱层及中压柱层析分离,得到5个化合物B1、B2、B3、B4和B5,经理化鉴定和有机波谱鉴定,确定其化合物分别为:人参皂苷Rg1、Re、Rc、Rd和Rb1。4.建立人参果提取物HPLC指纹图谱。色谱柱,Shimdzu ODS 5μm(4.6mm×250mm),以流动相A:乙腈,B:水,梯度洗脱,0~30min,A:20~20%;30~60min,A:80~20%;60~90min,A:20~20%。检测波长270nm,流速1mL/min;柱温25℃。根据10批次供试品测定结果,经与参照物对照以及比较所有测定和记录的色谱图,标定共有指纹峰15个,指纹图谱相似度均>0.90,经过稳定性、重现性、精密度考察,表明该方法稳定、可靠,可操作性强。本文创新点如下:1.首次采用HSCCC分离制备人参果中人参皂苷Re。2.首次建立人参果提取物HPLC指纹图谱。
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