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目的:本论文通过探讨抗肿瘤药物二甲双胍(Metformin)抑制卵巢癌HO8910和SKOV3细胞增殖和迁移的分子机理,鉴定出二甲双胍攻击卵巢癌的靶向途径和分子靶点,为二甲双胍在卵巢癌治疗中的临床应用以及卵巢癌的靶向治疗奠定理论基础。方法:(1)采用CCK8和EdU试剂盒分别检测二甲双胍对卵巢癌细胞的生长活性和DNA复制的效应,以及Transwell法测定二甲双胍对卵巢癌细胞迁移的效应。另外,采用Western blot法检测二甲双胍对增殖相关蛋白P21和survivin以及迁移相关蛋白E-cadherin、Snail和Vimentin表达的效应。(2)利用q RT-PCR技术检测不同浓度的二甲双胍处理卵巢癌HO8910/SKOV3细胞中LSD1 m RNA水平,确定二甲双胍对LSD1转录是否有影响。另外,通过Western blot方法检测二甲双胍对卵巢癌细胞中LSD1(组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1)蛋白水平的影响,以及对LSD1去甲基化酶活性的效应。(3)利用EGF激活PI3K/AKT通路或用PI3K抑制剂阻断PI3K/AKT通路,再用二甲双胍处理,通过Western blot方法检测二甲双胍对PI3K/AKT通路的效应。(4)利用LSD1敲低的卵巢癌细胞株,通过EdU试剂盒检测二甲双胍对LSD1敲低细胞内DNA合成、细胞增殖的效应以及Transwell法检测二甲双胍对LSD1敲低细胞迁移的效应;另外,通过Western blot方法从蛋白水平检测二甲双胍对LSD1敲低细胞的增殖、迁移相关蛋白表达的效应。结果:(1)CCK8实验检测结果显示二甲双胍抑制卵巢癌HO8910/SKOV3细胞的增殖;EdU试剂盒检测二甲双胍处理48 h后,卵巢癌细胞的DNA合成受到显著抑制;用Transwell法检测到二甲双胍显著抑制卵巢癌细胞的迁移。(2)q RT-PCR结果显示二甲双胍对卵巢癌HO8910/SKOV3细胞中LSD1的m RNA水平并无显著影响。Western blot结果显示卵巢癌细胞的LSD1蛋白表达随着二甲双胍浓度升高而逐渐降低,同时LSD1的特异性底物H3K4me2水平逐渐升高。(3)在卵巢癌HO8910/SKOV3细胞中,PI3K/AKT信号通路中AKT的磷酸化水平随二甲双胍处理浓度上升而下降。同时二甲双胍抑制EGF对PI3K/AKT通路的激活,并增强PI3K抑制剂对PI3K/AKT通路的抑制效应。(4)敲低卵巢癌HO8910和SKOV3细胞中LSD1的表达可抑制细胞增殖、迁移;二甲双胍可进一步增强LSD1敲低对细胞增殖和迁移的抑制效应。结论:(1)二甲双胍抑制卵巢癌HO8910/SKOV3细胞增殖和迁移。(2)二甲双胍对卵巢癌HO8910/SKOV3细胞中LSD1的调节发生在转录后水平,LSD1的特异底物H3K4me2的甲基化蛋白水平相应升高,说明二甲双胍抑制LSD1的去甲基化酶活性。(3)二甲双胍抑制PI3K/AKT通路,同时,增强PI3K抑制剂对PI3K/AKT通路的抑制效应,且减弱EGF的PI3K/AKT通路激活效应。课题组前期研究已证明在卵巢癌细胞中PI3K/AKT信号通路可调节LSD1的蛋白表达,因此二甲双胍很可能通过抑制PI3K/AKT通路下调卵巢癌细胞中LSD1的表达及其酶活性。(4)二甲双胍处理进一步增强LSD1敲低对卵巢癌细胞增殖和迁移的抑制效应,提示二甲双胍联合LSD1抑制可能是卵巢癌治疗的新策略。