双微体上ECM1基因在卵巢癌SKOV3细胞中生物学功能的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ie286
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目的:确认双微体上ECM1基因对卵巢癌SKOV3细胞生物学功能的影响,进一步确定ECM1基因参与卵巢癌发生发展的机制。  方法:在卵巢癌SKOV3细胞中转染ECM1基因,获得稳定转染并高表达ECM1的细胞系,然后进行MTT,划痕试验,侵袭实验,细胞周期,细胞凋亡以及裸鼠成瘤实验。  结果:经过PCR、酶切、连接和测序获得以UACC-1598cDNA为模板的ECM1基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-ECM1;将pcDNA3.1(+)-ECM1和空载体pcDNA3.1(+)分别转染卵巢癌细胞SKOV3,利用G418(400ug/ml)进行筛选,获得稳定转染并高效表达ECM1基因和空载体的SKOV3细胞系,分别表示为SKOV3-ECM1和SKOV3-vector;将SKOV3和上述获得的两组细胞同时进行MTT实验数据分析,结果显示SKOV3-ECM1细胞增殖速度显著高于SKOV3-vector组和SKOV3组;细胞周期结果显示SKOV3-ECM1细胞数量S期和G2期均比SKOV3-vector细胞的S期和G2期高,表明ECM1能够促进SKOV3细胞从G1期向S期和G2期的转化,因而促进了SKOV3细胞的分裂;细胞凋亡结果显示两组细胞之间无明显区别;通过24h和48h的划痕实验表明SKOV3-ECM1细胞在迁移能力明显强于SKOV3-vector组;在Transwell侵袭实验中,SKOV3-vector细胞穿过膜的平均细胞数为31.0,SKOV3-ECM1细胞穿过膜的平均数为129.0,两者具有显著性差异(p<0.01)。说明转染ECM1基因后细胞的侵袭能力增强;在裸鼠成瘤实验中设皮下成瘤组和腹腔注射成瘤组,两组都分别同时设置对照组,在注射后培养4周左右测量肿瘤的质量和体积,SKOV3-vector组质量和体积均值分别为412.3mg和257.36mm3,SKOV3-ECM1组质量和体积均值为404.8mg和239.22mm3发现两组之间无明显差异(p>0.05);同时观察腹腔注射组发现SKOV3-ECM1组肝脏转移情况更加明显。  结论:ECM1基因增强卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进卵巢癌的发生和发展。
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