目的:　　青娥丸(QingE Pill)首载于宋代的《太平惠民和剂局方》，由杜仲（盐炒）、补骨脂（盐炒）、核桃仁（炒）、大蒜四味药组成，是补肾的经典方剂。青娥丸组方严谨，方中杜仲为君，能补肝肾，强筋骨，用于肾虚腰痛，筋骨无力;补骨脂为臣，温肾助阳，用于腰膝冷痛;核桃仁为佐，滋补肝肾，健脾益气;大蒜为使，味辛，活血通络，交通心肾。本方补肾强腰，常服之，可壮筋骨、和血脉、乌须发。前期药理学研究表明，青娥丸具有雌激素样作用，可治疗妇女围绝经期综合症，证实祖国医学的补肾温肾法和现代医学的雌激素替代疗法有一定的相关性。课题组前期体内药代动力学研究结果表明，补骨脂与青娥丸方中其他药味配伍后，主要活性成分的血药浓度增加，清除率下降，药物的配伍增加了补骨脂活性成分在体内的作用时间和作用程度。　　本文在中药复方配伍理论的指导下，以补骨脂的主要活性成分补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂异黄酮、补骨脂定、异补骨脂查尔酮、补骨脂二氢黄酮甲醚为指标，研究补骨脂主要活性成分在Caco-2细胞模型上的吸收转运情况，并比较其与青娥丸方中其他药物配伍后转运参数的变化，从体外角度研究补骨脂及其与青娥丸中其他药物配伍后的吸收机制，以期能揭示青娥丸配伍的内涵。　　方法:　　采用超高压液相色谱-质谱/质谱联用(UPLC-MS/MS)技术建立补骨脂中主要活性成分在Caco-2细胞转运液中的测定方法;建立Caco-2细胞模型，考察时间、浓度、P-gp蛋白抑制剂维拉帕米、MRP-2蛋白抑制剂MK-571和BCRP蛋白抑制剂Ko143对补骨脂中单体化合物转运的影响;比较补骨脂提取物与青娥丸中其他药味配伍前后，补骨脂中主要活性成分转运参数Papp和Pratio值的变化，探讨青娥丸的配伍机制。　　结果:　　1)建立了补骨脂中主要活性成分在Caco-2细胞转运液中的UPLC-MS/MS分析方法。方法学考察结果表明，该方法专属性良好、灵敏度较高、分析时间短、准确可靠、稳定可行，适用于补骨脂中主要活性成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运研究。　　2)补骨脂中单体化合物在Caco-2细胞模型中的吸收转运研究:香豆素类成分补骨脂素和异补骨脂素在Caco-2细胞模型中以被动转运为主。当浓度升高到50μmol·L-1时，异补骨脂素的吸收转运有主动转运的参与，其主动转运可能由MRP-2蛋白和BCRP蛋白共同介导，而补骨脂素的Papp值基本不随浓度变化而变化，其转运始终是以被动扩散为主。黄酮类成分异补骨脂查尔酮和新补骨脂异黄酮在Caco-2细胞模型中的吸收转运始终伴随被动扩散和主动转运，其中异补骨脂查尔酮在低浓度时以被动扩散为主，在达到一定浓度后其主动转运达到饱和，其转运可能是由BCRP蛋白介导的主动转运。新补骨脂异黄酮的转运是以主动转运为主，其转运可能是由P-gp蛋白为主介导的。补骨脂二氢黄酮甲醚的转运是以被动转运为主，其转运机制较为复杂，需要进一步研究。　　3)补骨脂全成分提取物与青娥丸配伍组合物在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性比较研究:补骨脂全成分提取物在给药浓度为0.1 mg生药/mL时。除补骨脂苷和异补骨脂苷在转运前后浓度没有明显变化外，其余化合物的浓度在给药侧能观察到浓度发生明显变化，仅有补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮和异补骨脂查尔酮的浓度变化能被准确定量。其中补骨脂素和异补骨脂素的吸收转运特征与单体化合物相同，因其在转运液中浓度较低，未观察到配伍对二者的影响。新补骨脂异黄酮在补骨脂全成分提取物中Papp(BL)为6.76±0.59*10-6cm·s-1，AP→BL侧无法检测到其浓度，不能计算Papp值，与杜仲和核桃仁配伍后其Papp(BL)分别降为3.33±0.49*10-6cm·s-1和3.80±0.62*10-％m·s-1，尤其是与核桃仁配伍后AP→BL侧也检测其浓度，Papp(AP)为2.39±0.36*10-6cm·s-1，说明配伍有利于新补骨脂异黄酮在Caco-2细胞模型中的吸收转运，能部分解释补骨脂和杜仲配伍的协同作用以及配伍核桃仁能增强雌激素作用的原因。补骨脂全成分提取物单独给药时无法检测到异补骨脂查尔酮的浓度，仅在与大蒜配伍时，能检测到AP→BL侧的浓度，Papp(AP)为11.7±0.8*10-6cm·s-1，这可能与大蒜作为使药的地位有关。　　4)补骨脂乙酸乙酯提取物与青娥丸配伍组合物在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性比较研究:补骨脂乙酸乙酯提取物在Caco-2细胞模型中的给药浓度为0.5 mg生药/mL。其中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂异黄酮在0、30、60、90、150 min均能检测到转运后化合物的浓度;新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、异补骨脂查尔酮只能检测到部分时间点的浓度;补骨脂定、Corylifol A、补骨脂查尔酮在150 min内均不能定量检测到转运后化合物的浓度。补骨脂乙酸乙酯提取物单独给药时，补骨脂素和异补骨脂素的Papp(AP)分别为3.42±0.10*10-5、3.00±0.12*10-5 cm·s-1，Pratio值分别为0.96和0.98。与杜仲配伍后，补骨脂素和异补骨脂素的Papp(AP)值明显下降，分别为1.82±0.03*10-5、1.53±0.1*10-5 cm·s-1，Pratio值分别为1.44和1.46，在一定程度上不利于补骨脂素和异补骨脂素的被动转运。配伍杜仲后，促进了补骨脂二氢黄酮甲醚、新补骨脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的转运，对补骨脂异黄酮的影响不大。杜仲对补骨脂中香豆素类成分和黄酮类成分的体外转运的影响并不一致。核桃仁配伍补骨脂时，抑制异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮甲醚的转运，促进补骨脂二氢黄酮的转运，对补骨脂素的转运没有影响。大蒜配伍补骨脂时，对补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮影响不大，对新补骨脂异黄酮、补骨脂异黄酮和异补骨脂查尔酮的影响较为复杂。而在全方配伍时，对补骨脂素和异补骨脂素的影响不大，对黄酮类成分的作则用较为复杂。