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本研究从拟南芥Columbia生态型的T-DNA插入突变体库中筛选得到1株晚花突变体(编号为221-1)和1株早花突变体(编号为426-2),晚花突变体221-1叶片大而肥厚,莲座叶片数量多,营养生长期显著延长,开花时间延迟60 d左右。早花突变体426-2在短日照下叶面积小,莲座叶片数量少,抽苔后花茎分支数多,叶片数量增多,抽苔时间和开花时间都比野生型早10d左右。通过Southern杂交确定其T-DNA插入拷贝数均为单拷贝。
试验对TAIL-PCR的影响因素进行了优化,并利用优化的TAIL-PCR条件扩增了晚花突变体221-1 T-DNA插入位点的侧翼序列。将所获得序列与TAIR(The Arabidopsis Information Resource)中基因序列进行同源性比对,确定了突变体221-1中的突变基因为AT2G19520.1基因(晚花相关基因),明确了该基因是自主开花途径中一个关键基因一FVE基因,且T-DNA的插入位点位于基因的第六个外显子上。该突变体与已有的突变体fve-1、fve-2(Ler生态型)是等位突变体,与fve-3(Col-0生态型)是同一基因的不同突变体。因此,将该突变体命名为fve-4。突变体fve-1、fve-2、fve-3和fve-4都是FVE基因发生突变,但在FIrE基因中的突变位置不同(分别是第七个外显子,第八个外显子,第一个外显子和第六个外显子),且推迟开花的时间不同(fve-1推迟开花时间为12d,fve-2推迟开花时间为20d,而fve-4推迟开花时间长达60d左右)。
利用Genomie Walking技术获得了早花突变体T-DNA插入位点的侧翼序列。将所获得序列与TAIR中的已知基因序列进行同源性比对,确定了早花相关基因为AT4G36680.1基因(命名为EFS1),且T-DNA的插入位点位于AT4G36680.1基因的5非编码区。该基因具有PPR(pentatricopeptide repeats)家族蛋白和异戊烯基转移酶(IPT)的结构域,并在盐胁迫方面起作用,目前未发现该基因参与开花途径的报道。通过半定量的RT-PCR技术初步确定了EFSl基因属于光周期开花途径,通过促进TFL1、EMF1从而调节LFY和FT的表达。本研究构建了pCAMBIA1300-EFS1(含启动子)-NOS表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。