论文部分内容阅读
在临床上,膀胱逼尿肌功能障碍引起的尿频、尿急、尿失禁和遗尿极为常见。而逼尿肌收缩性、兴奋性和顺应性是影响膀胱功能的主要因素。缩泉丸出自《妇人良方》,由乌药、益智仁、山药组成。主治尿多,尿频,遗尿。具有温化肾气,缩尿止遗的功效,其功效可概括为“补肾缩尿”。研究已经证实,直接介导膀胱逼尿肌收缩的主要受体是M3R,介导膀胱逼尿肌松弛的主要受体是β3-AR。目的：以调节膀胱逼尿肌细胞收缩功能的M3R及其介导的信号转导通路和调节膀胱逼尿肌细胞舒张功能的p3-AR及其介导的信号转导通路为出发点,立足于逼尿肌功能异常与神经源性的相关性,以膀胱逼尿肌细胞为研究对象,阐明缩泉丸“缩尿”功效与现代医学调节逼尿肌舒缩功能的内在联系。方法：以自然衰老大鼠为“肾虚多尿”模型。取筛选合格的自然衰老大鼠(15月龄)70只,青年大鼠(3月龄)14只。设置组别：青年大鼠为正常对照组,14只,自然衰老大鼠分为模型对照组、金匮肾气丸组、缩泉丸低、中、高剂量组,14只/组。金匮肾气丸组的给药剂量为1.08g/kg/d;缩泉丸低、中、高剂量分别为0.293g/kg/d、0.585g/kg/d、1.170g/kg/d。采用酶消化与组织块相结合的方法原代培养自然衰老大鼠膀胱逼尿肌细胞；采用RT-PCR方法测定膀胱逼尿肌细胞M3R和β3-AR mRNA的表达；采用western blotting方法测定膀胱逼尿肌细胞M3R和β3-AR蛋白的表达；采用酶联免疫分析试剂盒测定膀胱逼尿肌细胞IP3含量；采用激光扫描共聚焦显微镜测定膀胱逼尿肌细胞Ca2+和CaM浓度。结果：1、缩泉丸减少自然衰老大鼠的尿量,提示缩泉丸有“缩尿”的作用；2、成功地原代培养出自然衰老大鼠膀胱逼尿肌细胞；3、缩泉丸能使自然衰老大鼠逼尿肌细胞M3R mRNA表达降低,β3-AR mRNA表达增加；4、缩泉丸能使自然衰老大鼠逼尿肌细胞M3R蛋白表达降低,β3-AR蛋白表达增加；5、缩泉丸能使自然衰老大鼠逼尿肌细胞的IP3的含量降低；6、缩泉丸使H-89阻断β3-AR介导的信号通路的自然衰老大鼠逼尿肌细胞PKA蛋白表达增加；7、缩泉丸使自然衰老大鼠逼尿肌细胞Ca2+和CaM浓度均降低。结论：缩泉丸下调M3R及其介导的信号转导通路和上调β3-AR及其介导的信号转导通路,从而维持了二者的动态平衡,缩泉丸能使自然衰老大鼠逼尿肌细胞Ca22+和CaM浓度均下调,降低逼尿肌的收缩力和兴奋性,减少逼尿肌异常收缩频率,保证了膀胱正常的生理功能。将缩泉丸“缩尿”理论结合神经源性来探讨缩泉丸作用的多靶性,为缩泉丸治疗肾虚多尿提供了确切的分子药理学基础,为中医“补肾缩尿”的理论给予新的诠释。