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[目的]翼状胬肉是眼科常见病和多发病，是局部球结膜及其下纤维血管组织呈三角形膜样增生而侵犯角膜的一种慢性眼表疾病。翼状胬肉的治疗方法虽多，但治疗效果都不甚理想，术后易复发，而且预防复发的辅助治疗有较多的毒副作用，因此，有必要寻求更有效、更安全的治疗方法。结缔组织生长因子(CTGF)是一种新发现的促纤维化细胞因子，是转化生长子β(TGF-β)致纤维化作用的直接下游效应介质。近年研究发现，CTGF与翼状胬肉的发生发展有密切关系。RNA干扰是将双链RNA导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种反应现象，能特异地介导同源基因沉默，抑制同源基因表达，从而下调相应蛋白水平及其功能。本研究应用结缔组织生长因子短发夹RNA(CTGFshRNA)表达质粒转染翼状胬肉成纤维细胞，研究其对CTGFmRNA和蛋白表达的影响及其对细胞外基质分泌的影响，为进一步探索翼状胬肉基因治疗新方法提供实验依据。
[方法]将构建成功的CTGFshRNA表达质粒与脂质体转染试剂Lipofectamin2000以不同的比例转染翼状胬肉成纤维细胞，应用流式细胞仪筛选出转染效率最高时质粒与脂质体的比例，作为最适比例。实验分为四组：CTGFshRNA表达质粒组、阴性质粒组、脂质体转染试剂组和空白对照组。按照最适比例转染成纤维细胞，24h后应用RT-PCR和Real-time qRT-PCR技术检测翼状胬肉成纤维细胞中CTGF mRNA表达水平；应用Western blot检测翼状胬肉成纤维细胞中CTGF蛋白质表达水平；应用羟脯氨酸检测法检测细胞上清液中胶原含量。从而探讨CTGF在翼状胬肉发生发展中的作用机制及CTGFshRNA表达质粒对翼状胬肉的治疗作用。
[结果]质粒与脂质体的转染比例为1:2.5时，转染效率最高，达(56.7±1.5)％。各实验组与空白对照组相比，阴性质粒组、脂质体转染试剂组对CTGF基因表达及细胞外胶原含量均无影响，而CTGFshRNA表达质粒组CTGFmRNA转录及蛋白表达水平明显下降(P<0.01)，细胞上清液中胶原含量明显减少(P<0.01)。其中CTGFmRNA转录水平，RT-PCR显示下调(66±6)％，荧光定量PCR显示下调47.7％，CTGF蛋白表达下调(63+4)％，上清液中胶原含量下调(32+4)％。
[结论]CTGFshRNA明显抑制翼状胬肉成纤维细胞CTGFmRNA和蛋白表达及细胞外基质中胶原的分泌，CTGFshRNA表达质粒可能对翼状胬肉的纤维化进展具有阻抑作用，有望成为临床防治翼状胬肉的新方法。