论文部分内容阅读
目的:1、筛选并鉴定血脂异常心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)危险人群的血清特异微小核糖核酸(micro-ribonucleic acids，miRNAs)，分析miRNAs与血脂异常程度、动脉粥样硬化性CVD不同发病风险的关系。2、探讨上述特异miRNAs在动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)模型小鼠血浆及肝脏中的水平变化与人血清中的一致性，分析其与高脂血症、As发生发展的关系，并运用生物信息学分析预测其可能靶基因。 方法:1、首先运用低密度芯片技术初筛血脂异常CVD危险分层人群低危组和健康对照组的血清miRNAs;其次在低危组中运用qRT-PCR技术对初筛结果中表达明显上调的miRNAs进行小样本复筛;再次在高危组、中危组、低危组中对复筛结果中水平显著升高的miRNAs进行大样本验证;并进一步采用相关性分析和Logistic回归分析探讨miRNAs与血脂异常程度、CVD不同发病风险的关系。2、采用LDLR-/-小鼠作为实验组，给予高脂饲料喂养，成功建立As小鼠模型;并以C57BL/6小鼠给予普通饲料喂养作为对照组;取喂养不同时间的各组小鼠主动脉，进行HE染色观察造模结果;取小鼠血浆、肝脏组织检测miRNAs水平;采用相关性分析探讨miRNAs与血脂指标、血浆miRNAs与肝脏miRNAs的相关性;并进一步运用生物信息学分析技术预测其可能靶基因，初步探讨其在脂质代谢中的作用。 结果:1、与对照组相比较，血脂异常CVD危险分层人群各组血清miR-186、miR-155、miR-92a、miR-193a-3p水平均显著增高(P均＜0.05);其中，高危组、中危组血清miR-193a-3p水平均显著高于低危组(P均＜0.05)，高危组血清miR-193a-3p水平显著高于中危组(P＜0.05)。相关性分析显示，在所有血脂异常CVD危险人群中，miR-193a-3p分别与TC、TG、LDL-C水平呈正相关;血清miR-92a分别与TC、TG水平呈正相关;血清miR-155与TG水平呈正相关;血清miR-186与HDL-C水平呈负相关。Logistic回归分析显示，血清高miR-193a-3p、miR-186、miR-155和miR-92a水平是血脂异常人群发生CVD的潜在危险指标，且miR-193a-3p对血脂异常CVD各危险分层人群具有鉴别意义。2、小鼠主动脉HE染色结果显示，9W实验组主动脉内膜出现早期玻璃样变;12W实验组主动脉内膜呈As特征性的泡沫样改变;15W实验组主动脉内膜可观察到明显的As斑块。与对照组小鼠和0W实验组小鼠相比，9W实验组小鼠肝脏miR-186、miR-155、miR-92a、miR-193a-3p水平显著升高(P均＜0.05)，血浆miR-186、miR-155、miR-92a水平显著升高(P均＜0.05);12W、15W实验组小鼠的血浆及肝脏中上述4种miRNAs水半均显著升高(P均＜0.05)。相关性分析显示，实验组小鼠血浆miR-186、miR-92a、miR-193a-3p分别与肝脏miR-186、miR-92a、miR-193a-3p水平呈正相关;实验组小鼠血浆miR-186、miR-155、miR-193a-3p分别与TC、LDL-C水平呈正相关;血浆miR-92a分别与TC、TG、LDL-C水平呈正相关，与HDL水平呈负相关;生物信息学预测miR-186、miR-193a-3p的靶基因与脂质代谢相关。 结论:1、血脂异常CVD危险人群血清miR-193a-3p、miR-186、miR-155和miR-92a水平均显著升高，有助于血脂异常CVD不同风险人群的鉴别，可望成为血脂异常人群CVD危险评估与分层的新型标志物。2、高脂饮食喂养LDLR-/-小鼠，可促进As病变的形成与发展，其血浆、肝脏miR-186、miR-155、miR-193a-3p、miR-92a水平随喂养时间逐渐升高，并与高脂血症、As进程密切相关;miR-186、miR-193a-3p可能通过调控脂质代谢相关基因，参与了As的发生、发展过程。